奧卡西平對戊四氮致癇未成年大鼠認(rèn)知功能的保護(hù)作用.pdf

1、目的： 癲癇(epilepsy，EP)系腦神經(jīng)元過度放電而引起的反復(fù)發(fā)作性腦功能障礙。在癲癇患者中，認(rèn)知功能的損害很常見。較成人而言，兒童由于興奮性和抑制性機(jī)制在未成熟大腦中遠(yuǎn)未達(dá)到平衡，不僅更易患癲癇，而且更易發(fā)生認(rèn)知功能障礙。認(rèn)知功能障礙發(fā)生與否及其損害程度和多種因素有關(guān)，如起病年齡、發(fā)病類型、病程長短及頻發(fā)程度、抗癲癇藥物的長期應(yīng)用等。由于抗癲癇藥物(antiepileptic drugs，AEDs)是目前治療癲癇的首選方

2、法，而且用藥是一個長期的過程，所以AEDs對認(rèn)知功能的損害受到特別關(guān)注。已有研究表明，傳統(tǒng)的AEDs如苯妥英鈉(phenytoin，PHT)、氯硝安定(clonazepam，CZP)和苯巴比妥(Phenobarbital，PB，商品名：魯米那)等，對癲癇患者的認(rèn)知功能均有不同程度的損害作用。奧卡西平(oxcabazepine，OXC)是2004年國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)進(jìn)口使用的一種新型抗癲癇藥物，關(guān)于其對認(rèn)知功能的影響國內(nèi)未見報(bào)道，

3、國外相關(guān)研究也較少。為了盡可能減小AEDs對癲癇患兒認(rèn)知功能的損害，科學(xué)評價(jià)OXC對認(rèn)知功能的影響，我們采取動物實(shí)驗(yàn)的方法，利用戊四氮(pentylenetetrazole，PTZ)腹腔注射建立癲癇未成年大鼠模型，并描記腦電圖(electroencephalogram，EEG)，致癇大鼠共分三組，分別給予OXC、PB和生理鹽水灌胃，在實(shí)驗(yàn)的三個階段觀察致癇后腦組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變，并通過Morris水迷宮試驗(yàn)(Morris water

4、maze test，MWMT)評價(jià)各組大鼠認(rèn)知功能的變化，和未致癇大鼠相對照。水迷宮試驗(yàn)之前通過開闊場地活動性試驗(yàn)(open field test.OFT)、斜板試驗(yàn)(inclined plane test，IPT)和懸吊試驗(yàn)(over hanging test，OHT)進(jìn)行情感運(yùn)動能力檢測，以排除因情感運(yùn)動方面的差異所導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差，從而探討OXC對癲癇未成年大鼠認(rèn)知功能的影響，為其合理的臨床選用提供理論依據(jù)。 方法：

5、 1 造模 健康三周齡雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠50只，體重50±10g，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，經(jīng)過三次水迷宮定位航行試驗(yàn)篩選，合格者進(jìn)行模型制備。篩選后獲得合格動物45只，將實(shí)驗(yàn)大鼠按水迷宮定位航行成績隨機(jī)分成六組：正常對照組(Control)6只、正常魯米那組(PB)6只、正常奧卡西平組(OXC)6只、致癇組(EP)12只、致癇后魯米那組(EP+PB)6只、致癇后奧卡西平組(EP+OXC)6只。制模過程中大鼠

6、出現(xiàn)死亡或不符合模型要求者，予以剔除并隨機(jī)補(bǔ)充，保證每組數(shù)量。EP組分為a、b兩個小組：a組(6只)用于認(rèn)知功能檢測；b組(6只)用于組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察。 EP模型：對EP、EP+PB、EP+OXC三個癲癇模型組大鼠分別按60mg/kg/天腹腔注射PTZ溶液，連續(xù)5天，按Racine標(biāo)準(zhǔn)達(dá)Ⅳ-Ⅴ級的大鼠視為誘發(fā)成功；同時(shí)，對Control、PB、OXC三個非癲癇模型組大鼠分別每天腹腔注射等量生理鹽水，連續(xù)5天。 2 灌胃

7、致癇后滿24小時(shí)開始，對OXC、EP+OXC兩組大鼠每天給予OXC 80mg/kg灌胃；對PB、EP+PB兩組大鼠每天給予PB 50mg/kg灌胃；對Control、EP兩組大鼠每天給予生理鹽水灌胃。 3 標(biāo)本制作 每次認(rèn)知功能檢測之前，取EP組的b小組中任意兩只大鼠進(jìn)行麻醉、固定液灌注、斷頭取腦、組織切片和HE染色等處理，于光學(xué)纖維鏡下觀察組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變。 4 認(rèn)知功能及情感運(yùn)動能力檢測在致癇后滿24小

8、時(shí)和喂藥7天兩個時(shí)間節(jié)點(diǎn)上，分別進(jìn)行情感運(yùn)動能力檢測，包括：開闊場地活動性試驗(yàn)、斜板試驗(yàn)和懸吊試驗(yàn)；在喂藥4～7天、11～14天、18～21天三個時(shí)間段中，分別進(jìn)行連續(xù)4天的，Moms水迷宮試驗(yàn)，其中：第1～2天為定位航行試驗(yàn)(place navigation test，PNT)，共包括五個系列，第3天為空間探索試驗(yàn)(spatialprobe test，SPT)，第4天為工作記憶試驗(yàn)(work memorytest，WMT)。

9、 5 EEG 認(rèn)知功能檢測完畢后，從非癲癇模型組和癲癇模型組中各選取2～3只大鼠進(jìn)行腦電圖描記。將大鼠麻醉后固定于腦立體定位儀上，放置雙側(cè)皮質(zhì)和雙側(cè)海馬電極，待大鼠清醒后，對非癲癇模型組描記正常腦電圖，對癲癇模型組按上述劑量給予PTZ腹腔注射制模成功后，描記癲癇腦電圖。 結(jié)果： 1 癲癇行為學(xué) 各癲癇模型組大鼠均出現(xiàn)不同程度的癇性發(fā)作，造模成功。 2 組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察光學(xué)纖維鏡下，癲癇大鼠的海

10、馬神經(jīng)元發(fā)生變性壞死。隨著時(shí)間的延長，壞死細(xì)胞的數(shù)量逐漸減少。 3 認(rèn)知功能及情感運(yùn)動能力檢測 3.1情感運(yùn)動能力檢測在致癇后滿24小時(shí)、喂藥7天兩個時(shí)間節(jié)點(diǎn)上，EP、EP+PB和EP+OXC三個癲癇模型組大鼠場地活動的格子數(shù)、直立次數(shù)、糞便顆粒、轉(zhuǎn)體能力和懸吊能力與正常對照組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 3.2 Morris水迷宮試驗(yàn) 3.2.1 PNT第1階段試驗(yàn)(喂藥4～5天)：共5個系列

11、試驗(yàn)。其中，EP組在第1系列試驗(yàn)中，尋找平臺的潛伏期較對照組延長，差異有顯著性(P<0.05)； EP+PB組在第1、2系列試驗(yàn)中，尋找平臺的潛伏期較對照組延長，差異有顯著性(P分別<0.05、<0.01)；其余各組在5個系列試驗(yàn)中的成績與對照組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。對學(xué)習(xí)進(jìn)度的統(tǒng)計(jì)中，只有EP+PB組成績較對照組差，差異有顯著性(P<0.05)。 第2、3階段試驗(yàn)(喂藥11～12天、喂藥18～19天)：兩階段試

12、驗(yàn)結(jié)果相同，即：在5個系列試驗(yàn)中，各組尋找平臺的潛伏期比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。對學(xué)習(xí)進(jìn)度的統(tǒng)計(jì)中，只有EP+PB組成績較對照組差，差異有顯著性(P<0.05)。 3.2.2 SPT第1階段試驗(yàn)(喂藥6天)：EP組和EP+PB組在平臺所在象限停留的時(shí)間較對照組縮短，差異有顯著性(P<0.05)，其余各組與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 第2、3階段試驗(yàn)(喂藥13天、喂藥20天)：兩階段試驗(yàn)結(jié)果相同，

13、即：只有。EP+PB組在平臺所在象限停留的時(shí)間較對照組縮短，差異有顯著性(P<0.05)。 3.2.3 WMT在3個階段試驗(yàn)中(喂藥7天、14天、21天)，各組尋找平臺的潛伏期與對照組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 4 EEG 癲癇模型組大鼠腦電圖顯示典型的尖.慢波、尖波和棘波發(fā)放。非癲癇模型組大鼠腦電圖無異常改變。 結(jié)論： 1、癲癇發(fā)作可導(dǎo)致大鼠海馬神經(jīng)元變性壞死。 2、癲癇不

14、影響未成年大鼠的情感運(yùn)動，但可導(dǎo)致其認(rèn)知功能一過性受損，主要體現(xiàn)在空間定位和長時(shí)記憶能力上，而學(xué)習(xí)進(jìn)度和短時(shí)記憶能力無明顯受損表現(xiàn)。 3、PB可導(dǎo)致PTZ致癇未成年大鼠的學(xué)習(xí)進(jìn)度和長時(shí)記憶能力受損，對短時(shí)記憶能力影響不明顯；正常未成年大鼠服用PB后的認(rèn)知功能無明顯受損表現(xiàn)。 4、OXC對PTZ致癇未成年大鼠早期(即神經(jīng)元變性壞死較明顯時(shí))的認(rèn)知功能損傷(主要體現(xiàn)在空間定位和長時(shí)記憶能力上)有一定的改善作用；正常未成年大鼠