對(duì)蝦白斑綜合癥病毒（WSSV）的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(white spot syndrome virus，WSSV)是迄今為止對(duì)全球?qū)ξr養(yǎng)殖業(yè)危害最為嚴(yán)重的一種對(duì)蝦病毒，自1987年以來，我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)在世界范圍內(nèi)首次發(fā)生養(yǎng)殖的斑節(jié)對(duì)蝦大規(guī)模死亡的事件之后，短短10余年，對(duì)蝦白斑綜合癥席卷了全球的對(duì)蝦養(yǎng)殖地區(qū)，給世界對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)造成了不可估量的損失，弄清其流行傳播機(jī)理是有效防治的基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)使用PCR(polymerase chain reaction)及套式PC

2、R的方法在基因水平上對(duì)WSSV分子流行病學(xué)進(jìn)行了研究。即以凡納濱對(duì)蝦樣品中所攜帶的WSSV為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，提取其基因組，用DNA保守區(qū)段所設(shè)計(jì)的引物對(duì)(E4)進(jìn)行套式PCR擴(kuò)增，以確定采樣獲得的對(duì)蝦樣品是否感染有WSSV。隨后以GeneBank中所發(fā)布的在中國(guó)廈門發(fā)現(xiàn)的WSSV株型的(WSSV-CH)的DNA全序列(GeneBank Accession No：AF332093)為標(biāo)準(zhǔn)，與另外2個(gè)株型中國(guó)臺(tái)灣株(WSSV-TW)和泰國(guó)株(WS

3、SV-TH)進(jìn)行全序列比對(duì)，運(yùn)用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)出11對(duì)DNA非保守區(qū)段的特異性引物(P1-P11)，經(jīng)PCR擴(kuò)增后，運(yùn)用瓊脂糖凝膠電泳方法和DNAstar，BioEdit，Clustalx1.83等DNA序列分析軟件處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果，綜合分析后確定出實(shí)驗(yàn)樣品所攜帶的WSSV的株型，為了解WSSV的來源和傳播途徑，更好地預(yù)防和治療對(duì)蝦白斑綜合癥提供依據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)連續(xù)對(duì)2005年廣東省境內(nèi)的肇慶市、江門市、

4、廣州市、珠海市、陽江市、茂名市、揭陽市、惠州市、汕頭市和汕尾市這10個(gè)地市所獲得的191批凡納濱對(duì)蝦樣品和2006年廣東省境內(nèi)的肇慶市、江門市、珠海市、陽江市、茂名市、揭陽市、惠州市和汕頭市這8個(gè)地市所獲得的196批次凡納濱對(duì)蝦樣品中，運(yùn)用E4引物對(duì)進(jìn)行PCR檢測(cè)，普查結(jié)果發(fā)現(xiàn)一擴(kuò)陽性樣品分別為2例和12例，陽性率為1.05﹪和6.09﹪，一擴(kuò)陽性率低，顯示了這個(gè)結(jié)果與所取樣的養(yǎng)殖塘基本上未發(fā)病的情況是一致的；二擴(kuò)陽性樣品分別為167例

5、和177例，陽性率達(dá)到82.2﹪和89.8﹪，顯示在養(yǎng)殖對(duì)蝦中，WSSV攜帶率很高。首次應(yīng)用11對(duì)特異引物對(duì)對(duì)中國(guó)華南地區(qū)凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖密集的福建省、廣東省、廣西壯族自治區(qū)和海南省所采的對(duì)蝦樣品進(jìn)行WSSV的DNA PCR檢測(cè)，并測(cè)序分析，經(jīng)序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，在廣東省、廣西壯族自治區(qū)、海南省所采樣品測(cè)得的這11段序列，基本上相同，而且與WSSV-TH一致，而在福建省所采樣品，測(cè)得的這11段序列與其它地區(qū)均不同而與WSSC-CH相似，由此可推