谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶μ3對乳腺癌細胞株MDA-MB-231生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的： 研究谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶μ3（glutathione S-transferase mu3，GSTM3）在乳腺癌中的作用，建立GSTM3穩(wěn)定過表達或沉默的乳腺癌細胞株MDA-MB-231，初步觀察GSTM3對乳腺癌細胞株MDA-MB-231生物學(xué)特性的影響。 方法： 構(gòu)建GSTM3真核表達重組質(zhì)粒pcDNA3.1/GSTM3，并利用真核表達載體pSilencer2.1-U6 neo構(gòu)建GSTM3特異性siRN

2、A表達質(zhì)粒；以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將構(gòu)建好的正確重組質(zhì)粒和對照載體質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細胞，RT-PCR和熒光定量PCR法檢測GSTM3 mRNA水平，western blot篩選GSTM3蛋白表達改變的穩(wěn)定細胞株；應(yīng)用MTT法和細胞劃痕運動實驗，觀察GSTM3對MDA-MB-231細胞體外增殖能力、遷移運動及蒽環(huán)類抗腫瘤藥物阿霉素敏感性等影響。 結(jié)果： 1.轉(zhuǎn)染GSTM3真核表達質(zhì)粒，經(jīng)RT-PCR、熒光實時定量P

3、CR和western實驗證明，GSTM3過表達的穩(wěn)定乳腺癌細胞株MDA-MB-231成功建立。 2.轉(zhuǎn)染GSTM3特異性siRNA表達質(zhì)粒，并經(jīng)RT-PCR和熒光實時定量PCR實驗證明，GSTM3表達沉默的穩(wěn)定乳腺癌細胞株MDA-MB-231成功建立。 3.GSTM3對MDA-MB-231細胞生物學(xué)特性的影響：①GSTM3過表達和沉默后對MDA-MB-231細胞體外增殖能力均無明顯影響（P>0.05）；②劃痕運動試驗中，

4、GSTM3表達沉默的MDA-MB-231細胞劃痕愈合快（P<0.05），GSTM3過表達的MDA-MB-231細胞則愈合慢（P<0.05）；③GSTM3過表達后，MDA-MB-231細胞對葸環(huán)類抗腫瘤藥物阿霉素的敏感性增加（P<0.05），GSTM3表達沉默后，MDA-MB-231細胞對阿霉素敏感性降低（P<0.05）。 結(jié)論： 1.成功構(gòu)建GSTM3過表達和沉默的乳腺癌細胞株MDA-MB-231。 2.GSTM