奶牛乳腺炎主要病原菌快速診斷及金葡菌α溶血素的原核表達(dá).pdf

1、乳腺炎對(duì)奶牛的主要疾病之一，主要由病原微生物感染引起，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，缺少針對(duì)引起奶牛乳腺炎的主要病原菌的準(zhǔn)確而快速的檢測(cè)方法；尤其對(duì)目前奶牛乳腺炎的主要病原菌缺少分子流行病學(xué)資料；國(guó)內(nèi)外還缺少預(yù)防奶牛乳腺炎效果較好的疫苗；我國(guó)眾多奶牛散養(yǎng)戶在頑固性乳腺炎面前束手無(wú)策等等，為探討、解決以上問(wèn)題，進(jìn)行了本項(xiàng)研究。本研究分為三部分： 第一部分：奶牛乳腺炎病原菌的分離鑒定對(duì)山東省濟(jì)南、泰安、臨沂三地區(qū)忠乳腺炎的

2、奶樣進(jìn)行病原菌分離鑒定。本研究結(jié)果表明由葡萄球菌、鏈球菌、腸桿菌引起的乳腺炎仍占主要地位，這對(duì)于奶牛乳腺炎的防治具有重要的指導(dǎo)。意義。 第二部分：應(yīng)用PCR方法快速檢測(cè)奶牛乳腺炎主要病原菌將PCR技術(shù)應(yīng)用到奶牛乳腺炎病原菌的檢測(cè)中去，建立一種在分子水平快速檢測(cè)乳腺炎主要病原菌的方法。根據(jù)GenBarlk已發(fā)表的序列設(shè)計(jì)了三對(duì)特異性引物，可同時(shí)檢測(cè)奶牛乳腺炎的三種主要病原菌：金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，無(wú)乳鏈球菌。本方法的特異性為1

3、00％，敏感性檢測(cè)的最低濃度為：1.25×10<'3>cfu/ml。與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比本試驗(yàn)所建立的方法具有快速，準(zhǔn)確和特異的優(yōu)點(diǎn)。 第三部分：金黃色葡萄球菌α溶血素的原核表達(dá)及其生物活性分析α溶血素(Gt-Hemolysin，a-HL)是金黃色葡萄球菌的主要毒力因子之一，利用PCR技術(shù)從金黃色葡萄球菌臨床分離株擴(kuò)增串編碼α溶血素的基因(α-HL)，經(jīng)克隆篩選和測(cè)序鑒定后，構(gòu)建成該基因的原核表達(dá)質(zhì)粒pET32a<'+>-α-HL