抗奶牛乳腺炎特異性卵黃抗體的制備及活性研究.pdf

1、奶牛乳腺炎是一種給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失的疾病，主要采用抗生素治療?？股丿煼〞?huì)引起動(dòng)物體內(nèi)甚至牛奶中藥物殘留和細(xì)菌耐藥性的增強(qiáng)，間接危害人類健康。因此，尋找一種安全、高效的抗生素替代品成為一個(gè)亟待解決的問題。特異性卵黃抗體(Egg yolk immunoglobulin，IgY)可治療由細(xì)菌或病毒感染引起的疾病，具有安全無殘留、不產(chǎn)生抗藥性、價(jià)廉易得等優(yōu)點(diǎn)，是一種具有廣闊應(yīng)用前景的抗生素替代品。本研究制備了抗奶牛乳腺炎主要致病菌—

2、—金黃色葡萄球菌和大腸桿菌特異性卵黃抗體，考察了抗體的體外抑菌活性、對(duì)吞噬細(xì)胞的吞噬調(diào)理作用及對(duì)奶牛乳腺炎的治療作用。 分別以滅活的金黃色葡萄球菌和大腸桿菌免疫蛋雞制備卵黃抗體。ELISA檢測(cè)表明，抗體最高效價(jià)可達(dá)25600，抗體高效價(jià)(≥6400)可持續(xù)100天；抗原濃度、蛋雞日齡和佐劑等影響免疫效果。特異性IgY含量隨時(shí)間變化趨勢(shì)與抗體效價(jià)變化趨勢(shì)基本一致，每毫升卵黃液中金黃色葡萄球菌和大腸桿菌特異性IgY的最高含量分別可達(dá)

3、1.86mg和1.88mg，總IgY的平均含量分別為9.82mg和9.95mg。采用水稀釋—鹽析—超濾—凝膠過濾技術(shù)從卵黃中分離純化IgY，經(jīng)超濾、凝膠過濾后抗體純度分別可達(dá)87.09％和94.52％，回收率分別為100.6mg/egg和27.68mg/egg。水稀釋—鹽析—超濾法所得抗體純度高、產(chǎn)量大，適于大規(guī)模分離純化。 體外抑菌實(shí)驗(yàn)表明，兩種特異性IgY均以劑量依賴方式抑制抗原菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)，大腸桿菌特異性IgY濃

4、度為20mg/mL，金黃色葡萄球菌特異性IgY濃度為10mg/mL時(shí)能完全抑制細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)。兩種特異性IgY對(duì)牛奶中分離的5株大腸桿菌和5株金黃色葡萄球菌分別具有生長(zhǎng)抑制活性。免疫熒光和免疫電鏡結(jié)果表明特異性IgY與細(xì)菌結(jié)合，使細(xì)菌表面結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。 細(xì)菌經(jīng)熒光素標(biāo)記，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)特異性IgY對(duì)奶牛體內(nèi)吞噬細(xì)胞噬菌作用的影響。特異性IgY濃度為1mg/mL時(shí)對(duì)吞噬細(xì)胞的吞噬促進(jìn)作用最強(qiáng)。該濃度IgY使外周血P

5、MN吞噬金黃色葡萄球菌的吞噬率由60.2％升高到90.5％，乳中PMN吞噬金黃色葡萄球菌的吞噬率由52.95％升高到82.45％；乳中PMN和Mφ吞噬金黃色葡萄球菌的吞噬率分別提高29.5％和27.66％，吞噬大腸桿菌的吞噬率分別提高26.5％和26.36％，IgY對(duì)兩種細(xì)胞的吞噬促進(jìn)作用差異不明顯(p>0.05)。 乳池內(nèi)分別注射抗金黃色葡萄球菌特異性IgY(200mg)和青霉素(1000mg)治療金黃色葡萄球菌引起的實(shí)驗(yàn)性乳