食源性單核細(xì)胞增多性李斯特菌的生物學(xué)特性.pdf

1、單核細(xì)胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是革蘭氏陽(yáng)性兼性胞內(nèi)寄生菌,廣泛存在于自然界和一些特定的環(huán)境中,如土壤、水、污水管等。上世紀(jì)80年代以來(lái),該菌作為一種重要的食源性病原菌已引起廣泛關(guān)注。Lm在食品生產(chǎn)和加工過(guò)程中可以通過(guò)多種途徑進(jìn)入食品,對(duì)消費(fèi)者的健康構(gòu)成潛在威脅。該菌具有很強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)性,能夠耐受的pH范圍為4.0～9.5、溫度范圍為1～45℃;其耐鹽能力也相當(dāng)強(qiáng),能在高于10％NaCl的環(huán)境

2、中存活。這些環(huán)境適應(yīng)性使其很難在食品加工生產(chǎn)過(guò)程中被完全殺滅,對(duì)食品安全性構(gòu)成嚴(yán)重威脅。因此,在食品生產(chǎn)和加工過(guò)程中建立Lm簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)方法及監(jiān)控體系具有重要意義。本研究的目的是通過(guò)對(duì)浙江省某市海產(chǎn)品從生產(chǎn)到加工過(guò)程中Lm的污染狀況進(jìn)行檢測(cè),明確海產(chǎn)品中Lm的污染狀況,并分析Lm分離株的毒力、耐藥性和基因型。此外,我們還對(duì)兩株典型單增李斯特菌奶源分離株毒力和環(huán)境適應(yīng)性進(jìn)行了研究。
　　 在浙江省某市5個(gè)海產(chǎn)品加工企業(yè)的蝦和魚(yú)

3、制品及其原料和加工環(huán)境共采樣482份,最終鑒定出8株單增李斯特菌,其檢出率為1.7％。其中主要分離自成品魚(yú)、成品蝦。海產(chǎn)品分離株的毒力差異較大,可以分為強(qiáng)毒和弱毒兩組。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明:單增李斯特菌海產(chǎn)品分離株對(duì)常用的十五種抗生素表現(xiàn)出較強(qiáng)的敏感性,所有菌株均對(duì)四環(huán)素和喹諾酮類(lèi)抗生素敏感;個(gè)別分離株對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)、復(fù)方新諾明、紅霉素或克林霉素具有一定程度的耐藥性,其中分離株1-16a具有多重耐藥性(對(duì)慶大霉素、阿米卡星、頭孢呋肟、復(fù)方新

4、諾明、克林霉素均有抗藥性)。
　　 用限制性?xún)?nèi)切酶SmaI對(duì)海產(chǎn)品分離株的基因組DNA酶切后進(jìn)行脈沖場(chǎng)電泳分析,DNA條帶數(shù)在8-12條之間,具有較好的分型性。聚類(lèi)分析結(jié)果表明8個(gè)單增李斯特菌海產(chǎn)品分離株中有7個(gè)分屬于2個(gè)PFGE亞型,分離株1-16a自成1個(gè)PFGE亞型。Lm1056,Lm1057和Lm6三個(gè)菌株分離自同一加工廠,其指紋圖譜基本一致,屬同一個(gè)克隆株系,Lm6為環(huán)境分離株,表明成品分離株Lm1056和Lm1057

5、可能來(lái)自加工環(huán)境。
　　 兩株單增李斯特菌奶源分離株H4和320在小鼠和雞胚中的毒力不同,對(duì)小鼠的LD50分別為108.14和105.55,320株的毒力與參考菌株接近(105.49)。單增李斯特菌分離株可以在低溫培養(yǎng)條件下穩(wěn)步生長(zhǎng),8℃培養(yǎng)條件下分離株320和H4的生長(zhǎng)速度基本一致,培養(yǎng)6天的活菌數(shù)比接種時(shí)分別增加1.48和2.05個(gè)Log;培養(yǎng)9天的活菌數(shù)比接種時(shí)分別增加2.41和3.34個(gè)Log。在12℃條件下分離株H4的

6、生長(zhǎng)顯著慢于320株,培養(yǎng)2天,分離株320的活菌數(shù)比接種時(shí)增加3.41個(gè)Log,而H4株則增加1.77個(gè)Log(P＜0.05)。這些結(jié)果提示:消毒牛奶一旦受到環(huán)境中抗性和毒力較強(qiáng)的單增李斯特菌污染,可以對(duì)消費(fèi)者健康構(gòu)成潛在威脅。牛奶中的李斯特菌在12℃溫度培養(yǎng)條件下能夠比較快速生長(zhǎng),若保存牛奶的溫度在8～12℃波動(dòng),其實(shí)際保質(zhì)期將明顯縮短。
　　 在8％NaCl條件下培養(yǎng),兩個(gè)分離株與參考菌株10403S的相對(duì)存活率的變化趨勢(shì)

7、基本一致。而在pH3.0條件下,分離株的相對(duì)存活率高于參考菌株10403S(P＜0.05)。pH(3.0～7.0)和NaCl(濃度范圍0.5～10％)對(duì)單增李斯特菌的生長(zhǎng)呈現(xiàn)交互作用,即隨著NaCl濃度的增加和pH值的下降,細(xì)菌的生長(zhǎng)速度逐漸減慢、滯后期漸長(zhǎng)。上述結(jié)果表明,單增李斯特菌分離株的環(huán)境適應(yīng)性比參考菌株10403S強(qiáng)。
　　 本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)單增李斯特菌分離株的毒力、藥敏性、環(huán)境適應(yīng)性和PFGE分型等研究,為今后進(jìn)一步開(kāi)展