先天性肌營(yíng)養(yǎng)不良的臨床、分子病理與分子遺傳學(xué)研究.pdf

1、背景：先天性肌營(yíng)養(yǎng)不良(congenital muscular dystrophy，CMD)為一類復(fù)雜的神經(jīng)肌肉病，是出生時(shí)或生后數(shù)月內(nèi)出現(xiàn)的原發(fā)性、進(jìn)行性肌病。本組疾病的共同特點(diǎn)是出生時(shí)或出生后不久表現(xiàn)全身嚴(yán)重的肌無(wú)力、肌張力低下以及骨關(guān)節(jié)攣縮，腱反射減弱或消失，血清肌酸肌酶(CK)不同程度升高，肌電圖(EMG)呈肌源性損害，肌肉活檢病理組織學(xué)提示肌營(yíng)養(yǎng)不良改變，即肌纖維大小不等，可見(jiàn)小圓狀發(fā)育不良的肌纖維，間質(zhì)結(jié)締組織增生，有正常的

2、抗肌萎縮蛋白(dystrophin)分布，無(wú)明顯超微結(jié)構(gòu)特殊變化。目前國(guó)際上將CMD分為三大類(表1-1)。CMD致殘率和致死率高，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。目前這類疾病的診斷主要依靠臨床表型，肌活檢組織學(xué)檢查是確診的依據(jù)。我國(guó)僅有數(shù)例CMD的臨床個(gè)例報(bào)道，缺乏分子病理及分子遺傳學(xué)方面的資料。 目的：對(duì)北京大學(xué)第一醫(yī)院兒科收集的15例CMD患兒進(jìn)行表型分析、分子病理及致病基因篩查研究，了解我國(guó)部分類型CMD患兒的臨床特點(diǎn)，建立部

3、分類型CMD的診斷方法，并為部分類型CMD患者的遺傳咨詢及產(chǎn)前診斷打下基礎(chǔ)。 方法：對(duì)北京大學(xué)第一醫(yī)院兒科收集的15例(男11例、女4例)CMD患兒的臨床表現(xiàn)、血清CK水平、EMG、頭顱MRI等特點(diǎn)進(jìn)行分析總結(jié)，將受試對(duì)象分為先天性肌營(yíng)養(yǎng)不良1A型(12例)及肌-眼-腦病(3例)兩組，對(duì)其中部分病人進(jìn)行肌肉活檢、常規(guī)病理學(xué)檢查，并采用單克隆抗人層粘連蛋白α2(laminin α2，又稱merosin)抗體、抗α-抗肌萎縮相關(guān)糖蛋

4、白(α-dystroglycan，α-DG)糖鏈抗體Ⅱ H6、抗β-抗肌萎縮相關(guān)糖蛋白(β-dystroglyean，β-DG)抗體、抗肌萎縮蛋白(dystrophin)C-末端(Dys-C)單克隆抗體行活檢肌肉免疫組織化學(xué)染色。對(duì)于肌一眼一腦病組病例在簽署知情同意書(shū)的前提下采集外周血5ml提取DNA，運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增目的基因編碼區(qū)序列和DNA直接測(cè)序的方法進(jìn)行肌.眼.腦病致病基因POMGnT1、FKRP、FCMD、POM

5、T2突變分析。全部工作均在北京大學(xué)第一醫(yī)院兒科研究室以及神經(jīng)病理實(shí)驗(yàn)室完成。 結(jié)果： 1、12例先天性肌營(yíng)養(yǎng)不良1A型患兒中有6例進(jìn)行了肌肉活檢，臨床均表現(xiàn)為生后～4個(gè)月內(nèi)發(fā)病，運(yùn)動(dòng)發(fā)育里程碑延遲，關(guān)節(jié)攣縮顯著，肌力、肌張力低下，腱反射減弱或消失。輔助檢查均表現(xiàn)為：血清CK水平呈10～50倍增高，EMG呈肌源性損害，頭顱MRI示腦白質(zhì)信號(hào)異常。6例患者肌肉活檢病理診斷符合肌營(yíng)養(yǎng)不良。采用特異抗體行活檢肌肉免疫組織化學(xué)染色

6、，顯示均為merosin染色陰性，α-DG、β-DGr、Dys-C呈陽(yáng)性表達(dá)。另外6例患兒缺少病理資料，但臨床表現(xiàn)與輔助檢查結(jié)果與以上6例患兒完全相似。 2、3例肌-眼-腦病患兒中有2例進(jìn)行了肌肉活檢，臨床均表現(xiàn)為生后～1個(gè)月內(nèi)發(fā)病，智力落后、運(yùn)動(dòng)發(fā)育里程碑延遲以及肌營(yíng)養(yǎng)不良表現(xiàn)：肌力、肌張力低下、關(guān)節(jié)攣縮、腱反射消失。輔助檢查均表現(xiàn)為：血清CK水平顯著增高，EMG呈肌源性損害。特征性表現(xiàn)：均存在眼部異常及腦畸形，包括注視差、對(duì)

7、光反應(yīng)遲鈍、視神經(jīng)萎縮，以及頭顱MRI顯示小腦多發(fā)小囊灶、腦干發(fā)育不良。2例患兒肌肉活檢病理診斷符合肌營(yíng)養(yǎng)不良，采用特異抗體進(jìn)行活檢肌肉免疫組織化學(xué)染色，顯示均為抗α-DG糖鏈抗體ⅡH6染色陰性，β-DG、merosin、Dys-C呈陽(yáng)性表達(dá)，提示存在α-DG糖基化缺陷，支持了抗肌萎縮相關(guān)糖蛋白病的診斷。另外1例患兒缺少病理資料，但臨床表現(xiàn)與輔助檢查結(jié)果與以上2例患兒完全相似。3例患兒均進(jìn)行了肌-眼-腦病致病基因 POMGnT1、FKR

8、P、FCMD、POMT2突變分析，基因篩查發(fā)現(xiàn)了31個(gè)單核苷酸多態(tài)(single nucleotide polymorphisms，SNPs)及5個(gè)同義突變(samesense mutation)，4個(gè)基因均未發(fā)現(xiàn)編碼區(qū)的致病突變。 結(jié)論：我們?cè)趪?guó)內(nèi)首次從臨床及分子病理水平確診了6例MDClA和2例抗肌萎縮相關(guān)糖蛋白病患兒；初步明確了我國(guó)MDCIA患兒的臨床特點(diǎn)；在國(guó)內(nèi)首次建立了部分先天性肌營(yíng)養(yǎng)不良的臨床、分子病理及分子遺傳學(xué)診