RanBP9對骨肉瘤細胞生物學行為和失巢凋亡抵抗影響的初步研究.pdf

1、骨肉瘤是一種起源于間葉組織的原發(fā)性惡性骨腫瘤，好發(fā)于兒童和青少年，主要發(fā)病部位為長骨干骺端。由于患者發(fā)病初期無明顯臨床癥狀，并且骨肉瘤具有高度轉(zhuǎn)移傾向，易發(fā)生肺轉(zhuǎn)移，導致患者預后很差。目前骨肉瘤主要的治療方法為化療，但是不少患者對化療藥物耐藥，加上轉(zhuǎn)移性骨肉瘤對常規(guī)的化療不敏感，使其臨床療效和長期生存率不佳，容易復發(fā)。近年來隨著基因治療的開展，人們發(fā)現(xiàn)基因在骨肉瘤中表達的情況不但決定了骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展和預后，而且也影響了其最終治療的效

2、果，尋找與骨肉瘤相關的新的基因治療靶點成為研究骨肉瘤的一個熱點。
　　RanBP9是Ran蛋白在微管組織中心的結合蛋白，參與了微管成核現(xiàn)象。研究發(fā)現(xiàn)RanBP9廣泛表達于不同組織和細胞系，并且作為一個支架蛋白與多種受體蛋白相互作用，參與細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導途徑:RanBP9參與了細胞周期的調(diào)控;調(diào)節(jié)凋亡前體活性影響細胞凋亡;參與神經(jīng)系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)的調(diào)節(jié);參與啟動細胞的免疫反應;并且RanBP9能抑制蛋白質(zhì)泛素化，被認為是腫瘤細胞抑制因子

3、。RanBP9在骨肉瘤中的表達情況及其發(fā)揮的生物學作用到底是什么？它是否能夠成為控制骨肉瘤細胞失巢凋亡抵抗和轉(zhuǎn)移的新的基因治療靶點？為了探討上述問題，我們進行如下三個部分的實驗:第一部分通過免疫組化染色、Real-time PCR、免疫熒光細胞染色和Western-blot方法檢測RanBP9在骨肉瘤組織和骨肉瘤細胞株中的表達情況。第二部分通過慢病毒載體敲低并建立穩(wěn)定低表達RanBP9的SaOS2細胞株，利用此細胞株建立體內(nèi)和體外實驗模

4、型，通過MTT、細胞克隆形成、細胞劃痕實驗、Transwell實驗、裸鼠成瘤、免疫組化染色等方法研究敲低RanBP9的表達對骨肉瘤細胞生物學功能的影響，探討RanBP9在骨肉瘤中發(fā)揮的功能作用。第三部分在第一、二部分對RanBP9在骨肉瘤中表達及功能作用研究的基礎上，初步探討RanBP9與骨肉瘤失巢凋亡抵抗的關系，進一步明確其在骨肉瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮的作用。
　　實驗主要結果及結論如下:
　　1.RanBP9在骨腫瘤組織（骨肉瘤、

5、骨巨細胞瘤）和骨肉瘤細胞株中均呈陽性表達，表達量的強弱與骨腫瘤組織和細胞的惡性程度呈負相關，表明RanBP9可能參與了骨肉瘤的發(fā)生過程。
　　2.敲低RanBP9的表達后骨肉瘤細胞的增殖能力、克隆形成能力、裸鼠成瘤能力均增強，而凋亡被抑制，表明RanBP9可能參與了骨肉瘤的發(fā)展過程。
　　3.RanBP9在骨肉瘤細胞失巢凋亡抵抗模型中低表達，而且敲低RanBP9的表達后骨肉瘤細胞的遷移和侵襲能力增強，表明RanBP9可能通過