不同供者來(lái)源臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性差異的初步研究.pdf

1、目的:
　　體外分離、培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Umbilical Cord derived mesenchymalstem cells， UC—MSCs)，并檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物CD309（血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2，VEGFR2，F(xiàn)lk-1）的表達(dá)，細(xì)胞分泌肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)和前列腺素E2(PGE2)的量，分別分析它們與供者信息:產(chǎn)婦年齡、孕周、胎兒體重和性別的相關(guān)性。
　　方法:
　　無(wú)菌條件下收集健康胎兒臍帶

2、，采用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)UC—MSCs，并進(jìn)行傳代培養(yǎng)。觀察細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)收獲細(xì)胞數(shù)量，繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)免疫表型，成骨成脂誘導(dǎo)分化鑒定。
　　流式細(xì)胞儀檢測(cè)培養(yǎng)的82份P1代細(xì)胞表面標(biāo)志物CD309表達(dá)。隨機(jī)抽取15份UC—MSCs傳代培養(yǎng)至P11代。ELISA法分別檢測(cè)P1、P3、P5、P7、P10和P11代UC—MSCs培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子HGF和PGE2的含量。
　　隨機(jī)抽取28份UC—MSCs擴(kuò)

3、增培養(yǎng)，P2代細(xì)胞接種后培養(yǎng)48小時(shí)收獲，細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)細(xì)胞數(shù)量，分析細(xì)胞增殖能力和供者信息（產(chǎn)婦年齡、孕周、胎兒體重、性別和分娩方式）的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　培養(yǎng)的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，呈梭形或紡錘形，傳代細(xì)胞形態(tài)均一，可連續(xù)傳至15代以上。通過(guò)檢測(cè)原代，P3代，P10代細(xì)胞在不同生長(zhǎng)時(shí)間細(xì)胞增殖量，繪制出生長(zhǎng)曲線(xiàn)。P1代、P3代和P7代UC—MSCs的細(xì)胞表型均為CD90+/CD105+/CD166+/CD14-

4、/CD34-/CD45-/CD79a-/HLA-DR-。P3代細(xì)胞分別通過(guò)成骨和成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，誘導(dǎo)分化成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。
　　不同供者來(lái)源UC—MGCs的P1代細(xì)胞表面標(biāo)志物CD309表達(dá)范圍為0％-16.0％(n=82)，P1代細(xì)胞CD309表達(dá)率越高，其細(xì)胞增殖倍數(shù)越高。P3代上清中HGF和PGE2含量分別為26029±11680(pg/ml)、3046±841(pg/ml)(n=15)，P5代上清中HGF和PGE2含量

5、分別為11660±5137(pg/ml)、2396±569(pg/ml)(n=15)。從P1代傳代培養(yǎng)至P11代，細(xì)胞培養(yǎng)上清中HGF含量隨傳代次數(shù)降低，PGE2含量無(wú)顯著性變化。
　　擴(kuò)增培養(yǎng)28份UC—MSCs獲得細(xì)胞增殖倍數(shù)，分析發(fā)現(xiàn):產(chǎn)婦年齡24-26歲組增殖倍數(shù)為4.39±1.15，比31-41歲組增殖倍數(shù)2.99±0.75高;男性胎兒增殖倍數(shù)為3.92±1.17，比女性胎兒增殖倍數(shù)3.03±0.87高;胎兒體重＜3.5

6、kg組增殖倍數(shù)為3.89±0.92，比≥3.5kg組增殖倍數(shù)2.87±1.19高;細(xì)胞增殖能力均是前者強(qiáng)于后者;孕周和分娩方式的不同細(xì)胞增殖能力無(wú)顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　本實(shí)驗(yàn)成功分離培養(yǎng)出人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，并傳代擴(kuò)增。不同供者來(lái)源UC—MSCs細(xì)胞表面標(biāo)志物CD309表達(dá)存在差異，高表達(dá)CD309的UC—MSCs細(xì)胞增殖能力更強(qiáng)。不同供者來(lái)源UC—MSCs分泌HGF和PEG2的量也有較大差異。隨傳代次數(shù)增加，細(xì)胞分