駱駝蓬脂肪酸經(jīng)時(shí)變化規(guī)律及駱駝蓬脂溶性提取物生物活性的初步研究.pdf

1、目的:駱駝蓬是蒺藜科駱駝蓬(Peganum harmalaL.)的全草及種子，是我國(guó)維吾爾族、哈薩克族和蒙古族等民族沿用已久的民族藥物。駱駝蓬中脂肪酸為其生物堿、黃酮等化合物的合成提供能量，與植物代謝息息相關(guān)。經(jīng)研究駱駝蓬種子脂溶性提取物中脂肪族化合物占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，而目前針對(duì)新疆駱駝蓬脂肪酸的研究報(bào)道極少。本文在建立了駱駝蓬脂肪酸含量測(cè)定方法及其指紋圖譜的基礎(chǔ)上初步探討駱駝蓬植物體內(nèi)脂肪酸的經(jīng)時(shí)變化規(guī)律，并對(duì)駱駝蓬脂溶性提取物的生物活性進(jìn)

2、行初步研究，為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)和合理開(kāi)發(fā)利用駱駝蓬植物資源提供試驗(yàn)依據(jù)與參考。方法:①以出油率為指標(biāo)，采用均勻設(shè)計(jì)法分別優(yōu)化了索氏提取法和超聲-微波協(xié)同萃取法提取駱駝蓬籽脂溶物的工藝參數(shù)，并對(duì)兩種方法的優(yōu)選工藝進(jìn)行橫向比較，確定合適的提取方法與工藝參數(shù)。②以5種脂肪酸（油酸、亞油酸、亞麻酸、棕櫚酸、花生酸）的總含量、甲酯化峰個(gè)數(shù)及百分峰面積的綜合評(píng)分為優(yōu)選指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)分別對(duì)4種甲酯化過(guò)程（KOH-甲醇法、BF3-甲醇法、NaOH-甲醇法

3、及1％H2SO4-甲醇回流法）進(jìn)行條件優(yōu)選，并通過(guò)橫向比較確定合適的脂肪酸甲酯化條件。③采用優(yōu)選的甲酯化條件，進(jìn)行氣質(zhì)分析，得出駱駝蓬地上部分、種子及根中脂肪酸的種類(lèi)及相對(duì)百分含量。④初步建立5種駱駝蓬脂肪酸的含量測(cè)定方法并測(cè)定其不同采摘季節(jié)、不同部位的脂肪酸含量。⑤初步建立駱駝蓬地上部分脂溶性提取物GC指紋圖譜。⑥對(duì)駱駝蓬不同部位（地上部分、種子及根）水提物、不同月份水提物、駱駝蓬總堿及脂溶性提取物進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)，測(cè)得其對(duì)小鼠的半數(shù)

4、致死量(LD50)。⑦對(duì)脂溶性提取物抗炎及鎮(zhèn)痛的藥效學(xué)進(jìn)行初步研究。結(jié)果:①索氏提取法比較適合駱駝蓬籽脂溶物的提取，優(yōu)選工藝條件為:以石油醚為提取溶劑，溶劑倍數(shù)為20倍，于80℃的水浴回流11小時(shí)，出油率為30.1％。②通過(guò)對(duì)4種甲酯化方法(KOH-甲醇法、BF3-甲醇法、NaOH-甲醇法及1％H2 SO4-甲醇回流法)的優(yōu)選試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行橫向比較，結(jié)果表明1％H2SO4-甲醇回流法更適合用于駝蓬籽中脂肪酸的甲酯化，其優(yōu)選條件為:醇油比4

5、∶1，催化劑用量2∶1，反應(yīng)溫度為80℃，回流時(shí)間為30min，棕櫚酸甲酯化率為98.1％，油酸甲酯化率為97.5％，亞油酸甲酯化率為98.0％，亞麻酸甲酯化率為98.5％。四種脂肪酸甲酯化率均大于97％。③采用優(yōu)選的甲酯化條件，運(yùn)用氣質(zhì)聯(lián)用分析，用面積歸一化法計(jì)算出各組分的相對(duì)百分含量，經(jīng)CAS數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，確定了駱駝蓬地上部分及根中脂肪酸的種類(lèi)，并與課題組前期獲得的駱駝蓬種子中脂肪酸的種類(lèi)進(jìn)行對(duì)比。地上部分共分離鑒定了18種化學(xué)成分，

6、其中有14種脂肪酸，主要成分為亞油酸(31.3％)、油酸(18.2％)、棕櫚酸(9.8％)、硬脂酸(4.2％)。根分離鑒定了19種化學(xué)成分，其中有16種脂肪酸，主要成分為木蠟酸(23.3％)、山崳酸(18.8％)、亞油酸(12.5％)、油酸(11.2％)、棕櫚酸(6.5％)、二十六碳酸(5.1％)。④用于測(cè)定駱駝蓬中脂肪酸含量的測(cè)定方法符合方法學(xué)要求，不同批次、不同季節(jié)采摘的駱駝蓬的不同部位（地上部分、種子及根）的脂肪酸的含量存在差異，

7、主要體現(xiàn)在:地上部分和種子中脂肪酸的種類(lèi)基本相似，以亞油酸、油酸等不飽和脂肪酸為主;駱駝蓬根中以木蠟酸、山崳酸等飽和脂肪酸為主。⑤建立了不同采收時(shí)間（5-8月份）駱駝蓬地上部分氣相指紋圖譜，有13個(gè)共有峰，共有峰占總峰面積的95％以上。⑥駱駝蓬不同提取物的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果為:駱駝蓬根水提取物的LD50為4439mg/kg，95％可信區(qū)間為2800～5000mg/kg，駱駝蓬種子水提取物的LD50為4439mg/kg，95％可信區(qū)間為28

8、00～5000mg/kg，試驗(yàn)觀察表明駱駝蓬根水提取物的毒性反應(yīng)更為明顯。駱駝蓬地上部分不同月份水溶性提取物對(duì)小鼠的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果(LD50)為:五月份的LD50為9963.4mg/kg（95％可信區(qū)間為9003.5～10637mg/kg）、六月份的LD50為10262mg/kg（95％可信區(qū)間為7809.7～11182mg/kg）、七月份的LD50為10427mg/kg(95％可信區(qū)間為9357.6～11554mg/kg)、八月份的

9、LD50為12031mg/kg（95％可信區(qū)間為9357.6～11554mg/kg）。駱駝蓬脂溶性提取物與駱駝蓬總生物堿提取物急性毒性試驗(yàn)結(jié)果為:駱駝蓬脂溶性提取物的LD50為7618.2mg/kg（95％可信區(qū)間為5839.9～10303mg/kg），駱駝蓬生物堿提取物的LD50為672.84mg/kg（95％可信區(qū)間為529.9～882.16mg/kg）。⑦脂溶物的高、中劑量組和總堿的高劑量組均能降低不同時(shí)間點(diǎn)小鼠的足跖腫脹，與空白

10、對(duì)照相比具有顯著性差異(P＜0.05)。小鼠扭體試驗(yàn)結(jié)果表明:與模型組相比，總堿和脂溶物的高、中劑量組對(duì)小鼠扭體次數(shù)的減少具有顯著性差異(P＜0.05);與陽(yáng)性藥相比，只有總堿的高劑量組對(duì)小鼠具有明顯的鎮(zhèn)痛作用(P＜0.05)。結(jié)論:①優(yōu)選出的索氏提油工藝穩(wěn)定、合理、可行，可用于試驗(yàn)室提取駱駝蓬籽的脂溶性物質(zhì)。②優(yōu)選出的甲酯化工藝穩(wěn)定、反應(yīng)時(shí)間短，為建立測(cè)定駱駝蓬籽中脂肪酸含量的氣相色譜法奠定了基礎(chǔ)。③駱駝蓬植物中脂肪酸的含量及種類(lèi)的分