全氟化碳對脂多糖致A549細胞損傷的生物學影響.pdf

1、【目的】
　　從細胞生物學角度研究全氟化碳(PFC)對脂多糖(LPS)誘導A549細胞損傷的保護作用,為臨床應用PFC治療急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)提供理論依據(jù)。
　　【方法】
　　常規(guī)傳代培養(yǎng)人肺泡上皮樣細胞A549,將其分為四組:
　?、賹φ战M:不作任何干預;
　　②PFC(全氟辛烷)組:按10％體積比(PFC:培養(yǎng)液)加入全氟辛烷;
　?、跮PS組:干預時按100μg/ml的濃度加入LPS;

2、
　?、躊FC+LPS組(共培養(yǎng)組):按上述濃度同時加入PFC和LPS。
　　檢測以下四個方面:
　　(1)不同組A549細胞給予相應處理后24h、48h及72h于倒置顯微鏡下觀察形態(tài)學變化并拍照記錄;
　　(2)A549細胞按一定細胞數(shù)鋪板,每組3個復孔,加藥后每天應用細胞計數(shù)法計數(shù)各組細胞數(shù)目,共6天,繪制細胞生長曲線;
　　(3)待細胞生長至融合狀態(tài)時應用無菌槍頭于融合單層細胞上劃痕,其后按不同分組加

3、藥處理并同時換用含1%胎牛血清的培養(yǎng)液,以給藥時刻為零時,分別于0h、24h及48h倒置顯微鏡下觀察劃痕愈合情況并拍照記錄,imageJ(NIH Image 1.55)軟件計算各組劃痕愈合面積百分比及劃痕邊緣細胞核間距;
　　(4)A549細胞常規(guī)傳代培養(yǎng),按不同分組給藥的同時換用含1%胎牛血清的培養(yǎng)液,24h后應用流式細胞術檢測凋亡。
　　【結果】
　　(1)細胞形態(tài)學顯示LPS組較其它三組細胞明顯稀疏,皺縮明顯,部

4、分細胞呈圓形,生長狀態(tài)變差;其余三組細胞形態(tài)飽滿,排列緊密,生長狀態(tài)良好。
　　(2)細胞生長曲線顯示LPS組細胞增殖受抑制,LPS組與其余各組細胞數(shù)目的差異從加藥后第四天開始均達到了統(tǒng)計學顯著性(P<0.05)。
　　(3)劃痕愈合實驗顯示LPS組48小時修復面積百分比:25.3±2.1%,對照組:42.8±0.9%,PFC組:37.0±2.9%,LPS+PFC組:33.2±3.9%。LPS組與其余各組相比差異均達到了統(tǒng)計

5、學顯著性(P<0.05)。劃痕邊緣細胞核間距:LPS組:20.7±2.53um,對照組:25.2±3.91um,PFC組:24.9±3.53um,LPS+PFC組:24.5±2.98um。LPS組與其它各組相比差異均達到了統(tǒng)計學顯著性(P<0.05)。
　　(4)流式細胞術檢測A549細胞凋亡表明,對照組、LPS組、PFC組及LPS+PFC組的細胞凋亡率分別為:5.33±2.55%、35.76±5.15%、5.22±2.57%及1

6、3.39±4.34%;與對照組和PFC組比較,LPS作用于A549細胞24h后,細胞的凋亡率顯著升高(P<0.01);與對照組比較,全氟化碳組細胞凋亡率的差異無統(tǒng)計學意義;與LPS組比較,共培養(yǎng)組干預24h后,A549細胞的凋亡率顯著降低(P<0.01)。
　　【結論】
　　(1)PFC能夠顯著改善LPS對A549細胞形態(tài)及生長狀態(tài)的不良影響。
　　(2)PFC能夠顯著改善LPS對A549細胞增殖的抑制作用。