白藜蘆醇對(duì)髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞Sonic hedgehog信號(hào)通路的影響及其神經(jīng)生物學(xué)意義分析.pdf

1、目的： 1)觀察Sonic hedgehog(Shh)信號(hào)通路及其下游靶基因Nmyc在人髓母細(xì)胞瘤(medulloblastoma，MB)中的表達(dá)情況； 2)分析白藜蘆醇(resveratrol，Res)對(duì)人MB細(xì)胞系UW228-2和UW228-3的Shh信號(hào)通路及其下游靶基因Nmyc表達(dá)的影響，探討Res對(duì)人MB作用的分子機(jī)制，從而為臨床改善MB的治療現(xiàn)狀提供理論依據(jù)。 方法： 從臨床收集18例人MB腦

2、組織及11例大鼠腦組織的石蠟包埋標(biāo)本，利用自行研制的組織微陣列儀制成石蠟組織微陣列，進(jìn)行Shh和Glil的免疫組織化學(xué)染色(IHC)，觀察這些因子在人MB及大鼠腦組織中的表達(dá)情況。UW228-2、-3細(xì)胞系培養(yǎng)于含有10％胎牛血清的DMEM(Dulbecco's Modified Eagle’s Medium)培養(yǎng)基中，用100μM Res處理細(xì)胞48h。為便于細(xì)胞形態(tài)觀察和免疫細(xì)胞化學(xué)染色(ICC)，將無(wú)菌細(xì)胞爬片預(yù)先置于培養(yǎng)皿中，取

3、出時(shí)用冷丙酮固定。同時(shí)制備細(xì)胞懸液并離心沉淀用于RNA和蛋白質(zhì)的提取。采用RT-PCR、Western-Blotting和ICC等方法分析Res處理前后UW228-2，UW228-3中Shh、Glil和Nmyc的表達(dá)改變情況。 結(jié)果： 1)Shh和Glil在人MB組織中染色陽(yáng)性率分別為88.89％和94．44％，均強(qiáng)于對(duì)照組； 2)Res有效抑制UW228-2、-3生長(zhǎng)，誘導(dǎo)其分化和調(diào)亡，在mRNA和蛋白水平上，

4、Res下調(diào)Shh、Glil和Nmyc的表達(dá)。 結(jié)論： 1)人MB組織中Shh、Glil和Nmyc的表達(dá)高于對(duì)照組。因此，Shh信號(hào)通路在大多數(shù)人MB中處于活化狀態(tài); 2)首次發(fā)現(xiàn)，Res在抑制人MB細(xì)胞系UW228-2、-3細(xì)胞增殖，促進(jìn)分化并誘導(dǎo)凋亡的同時(shí)，還在mRNA和蛋白水平抑制Shh、Glil和Nmyc的轉(zhuǎn)錄與產(chǎn)生。Res對(duì)人MB細(xì)胞Shh信號(hào)通路的抑制可能與其增殖抑制、促分化和凋亡功能有某種內(nèi)在聯(lián)系。