EGF、雌二醇和生長抑素對人肝癌細胞生物學行為影響的研究.pdf

1、目的：原發(fā)性肝癌是我國、也是世界上最常見的惡性腫瘤之一，嚴重危害人類的健康。自20世紀90年代以來，我國肝癌的死亡率已上升到腫瘤死亡率的第二位。近年我國肝癌治療效果得到明顯提高，但由于肝癌發(fā)生機制尚未闡明，治療效果仍不滿意。肝癌發(fā)生是一個多因素、多步驟的復雜生物學過程。 HBV、HCV、表皮生長因子(EGF)、性激素、細胞因子、癌基因及抑癌基因等多種因素參與并促進了腫瘤的發(fā)生。EGF促進肝癌細胞DNA的合成，促進肝癌的發(fā)生與發(fā)展。EG

2、FR廣泛分布于肝細胞及腫瘤細胞，與細胞增殖、分化調(diào)節(jié)、腫瘤轉化密切相關。EGF和EGFR在肝癌存在過表達，與肝癌的形成關系密切。雌二醇(E2)主要在肝臟代謝和滅活，可以誘導肝原癌基因活化。雌激素受體(ER)調(diào)控基因表達，與肝癌發(fā)生、發(fā)展和預后有關。生長抑素(SST)和生長抑素受體(SSTR)在體內(nèi)分布廣泛，SST及其類似物(SSTA)在體外可以抑制多種人肝癌細胞株生長，可以分別對EGF、EGFR、E2、ER產(chǎn)生抑制作用，從而發(fā)揮抗腫瘤作

3、用。在EGF、E2、SST及其受體的信號傳導途徑中，有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)發(fā)揮了重要作用，成為它們之間相互作用的基礎。EGF、E2、SST及其受體與人肝癌細胞增殖的關系及其相互作用機制尚未闡明，且缺少系統(tǒng)研究的報道。本課題試圖通過研究人重組表皮生長因子(rhEGF)、人β-雌二醇(β-E2)和人生長抑素(hSST)對人肝癌HepG2細胞增殖的影響和HepG2細胞EGF、EGFR、E2、ER、SST和SSTR的變化，探討上述諸

4、因素在肝癌發(fā)生中的相互作用及其機制，為應用生長抑素治療肝癌提供實驗及理論基礎。 材料與方法：將人肝癌 HepG2 細胞株常規(guī)培養(yǎng)于RPMI 1640培養(yǎng)液中(內(nèi)含已用葡聚糖和活性炭去除了雌激素的10％小牛血清)，培養(yǎng)液中加入青霉素(濃度100U/m1)和鏈霉素(濃度100ug/m1)，在37℃、5％CO<,2>培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并進行傳代。 結論: 1．EGF和E2均能提高人肝癌細胞增殖指數(shù)，呈濃度一時間依賴關系，其中

5、濃度對增殖指數(shù)的影響更明顯。Hsst可抑制肝癌細胞增殖，呈濃度－時間依賴關系，濃度對抑制率的影響明顯大于時間。 2．EGF、E2能分別提高人肝癌細胞EGF、EGFR、ER和E2陽性表達率，呈時間依賴，隨培養(yǎng)時間延長陽性表達率顯著提高，EGF、E2互相促進自身及其受體的表達來促進細胞增殖。 3．EGF、E2和SST能促使人肝癌細胞發(fā)生形態(tài)、結構、分裂時相等形態(tài)學改變；SST還會引起肝癌細胞凋亡。 4．Hsst能誘導

6、人肝癌細胞SST及其受體表達增加，并呈量效和時效關系。 5．SST能抑制人肝癌細胞EGF、EGFR、E2和ER的陽性表達率，隨濃度增加和培養(yǎng)時間延長，抑制作用更強。 6．Hsst提高人肝癌細胞SST和SSTR表達，抑制EGF、EGFR、E2、ER之間的信息傳導，是SST抑制人肝癌細胞增殖的主要機制。 7．EGF和E2同時升高，促進肝癌細胞增殖的作用更顯著，為應用EGF、E2、EGFR和ER特異抗體、反義基因封閉以