MLL重排急性白血病的臨床和遺傳學(xué)特點(diǎn)研究及MLL白血病原代細(xì)胞異種移植小鼠模型的建立.pdf

1、本文內(nèi)容分為兩部分：
　　第一部分
　　目的:11q23/MLL急性白血病(11q23/MLL acute leukemia,11q23/MLL AL)是一種常見(jiàn)的細(xì)胞遺傳學(xué)異常。11q23/MLL AL的易位和重排涉及眾多的伙伴基因,應(yīng)用傳統(tǒng)的細(xì)胞遺傳學(xué)分析(conventional cytogenetical assay, CCA)檢測(cè)所有的MLL重排會(huì)比較困難。為了提高11q23/MLL AL染色體畸變的檢測(cè),我們聯(lián)合

2、應(yīng)用多重巢式 RT-PCR分析染色體畸變的方法。最近已發(fā)現(xiàn)大量的分子標(biāo)記是急性白血病中潛在的預(yù)后因素。評(píng)估這些分子標(biāo)記的相互關(guān)系和相對(duì)預(yù)后已變得尤為重要。我們?cè)?1q23/MLL AL中檢測(cè)了這些分子突變和免疫分型,這可能會(huì)為11q23/MLL AL提供良好的治療策略。
　　方法:采用多重巢式 RT-PCR聯(lián)合染色體核型分析對(duì)2009年至2011年間347例初治AL患者進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)檢測(cè)出11q23/MLL AL同時(shí)檢測(cè) NPM1,

3、FLT3,CEBPα,c-kit, DNMT3A,IDH1和IDH2分子突變。對(duì)11q23/MLL AL患者采取標(biāo)準(zhǔn)的化療方案治療后,采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型評(píng)估 OS的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　結(jié)果:347例 AL患者中,通過(guò) CCA檢測(cè)出2例11q23/MLL AL,通過(guò)多重巢式 RT-PCR則檢測(cè)出28例11q23/MLL AL。在這28例11q23/MLL AL中有4例(14.28％,4/28)檢測(cè)出 FLT3突變;有1例(3.5

4、％,1/28)檢測(cè)出 DNMT3A突變;有1例(3.5％,1/28)檢測(cè)出 IDH2突變。在這28例11q23/MLL AL中未檢測(cè)出有 NPM1、CEBPα、c-kit和IDH1突變。多變量 Cox回歸分析未顯示出分子突變與11q23/MLL AL的預(yù)后相關(guān)。
　　結(jié)論:常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)技術(shù)相輔相成有助于提高11q23/MLL AL的檢出率。11q23/MLL AL患者的細(xì)胞遺傳學(xué)和分子學(xué)研究結(jié)果為選取治療方法,尤其是

5、否選取造血干細(xì)胞移植提供了最佳治療策略。
　　第二部分
　　目的：本研究旨在利用混合譜系白血病(Mixed Lineage Leukemia, MLL)細(xì)胞在NOD/SCID免疫缺陷小鼠中建立人鼠嵌合的異種移植模型。
　　方法：選取 MLL/AF4重排的白血病患者的單個(gè)核細(xì)胞懸液通過(guò)尾靜脈注射的方式接種給 NOD/SCID小鼠。每周稱量體重,接種14天后經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry, FC)檢測(cè)小鼠外周血

6、中CD45+細(xì)胞的百分比。當(dāng)小鼠出現(xiàn)精神萎靡、乏力、蒼白、豎毛,或體重下降20％時(shí),對(duì)其施行安樂(lè)死,解剖動(dòng)物。取小鼠脾臟及肝臟行 HE染色,并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血、骨髓、脾臟和淋巴結(jié)細(xì)胞懸液中CD45+細(xì)胞的百分比。
　　結(jié)果：以對(duì)照組小鼠的單個(gè)核細(xì)胞做陰性設(shè)門,通過(guò) FC監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)分別于接種35±4后,在病例的小鼠外周血中檢測(cè)到人 CD45+細(xì)胞,且其百分比隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增高,最終達(dá)61.0％±3.5％;大體觀上發(fā)現(xiàn)小鼠脾臟