EMMPRIN在胃癌SGC-7901細(xì)胞中的表達(dá)及生物學(xué)影響研究.pdf

1、目的:構(gòu)建pEGFP-N1-EMMPRIN及pshRNA-EMMPRIN重組質(zhì)粒，通過脂質(zhì)體Lipofectamine2000將其轉(zhuǎn)染SGC-7901細(xì)胞，驗(yàn)證其在SGC-7901細(xì)胞中的表達(dá)情況，并檢測其對SGC-7901細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)中侵襲以及遷移的變化，從基因的維度提供解決消化道腫瘤問題的基本思路。
　　方法:(1)從結(jié)腸癌細(xì)胞株SW-480細(xì)胞中提取總RNA，通過RT-PCR獲得EMMPRIN基因，將其克隆到質(zhì)粒pEGFP-

2、N1上，構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP-N1-EMMPRIN，將其轉(zhuǎn)染SGC-7901真核表達(dá)細(xì)胞，通過對其綠色熒光蛋白表達(dá)情況的觀察、RT-PCR及Western blot檢測其在SGC-7901中的表達(dá);(2)體外合成針對人EMMPRIN的干擾質(zhì)粒pshRNA-EMMPRIN4組，通過測序、RT-PCR和Western blot檢測其在SGC-7901中的表達(dá)并篩選出沉默效率最高的質(zhì)粒組;(3)將pEGFP-N1-EMMPRIN及pshRN

3、A-EMMPRIN分別通過脂質(zhì)體Lipofectamine2000將其轉(zhuǎn)染SGC-7901細(xì)胞，Transewell檢測各組SGC-7901細(xì)胞侵襲及遷移生物學(xué)行為的影響。
　　結(jié)果:(1)通過RT-PCR獲得EMMPRIN基因片斷，成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP-N1-EMMPRIN，驗(yàn)證了其在SGC-7901細(xì)胞中表達(dá)并與綠色熒光蛋白融合;(2)成功構(gòu)建pshRNA-EMMPRIN，并經(jīng)測序、RT-PCR及western blot