多位點(diǎn)基因多態(tài)性分析與乙肝肝硬化風(fēng)險(xiǎn)的分子預(yù)測(cè).pdf

1、背景與目的：乙肝肝硬化一般不可逆轉(zhuǎn)，應(yīng)重在預(yù)防。慢性乙肝病毒（HBV）感染者只有少數(shù)發(fā)展為肝硬化，多數(shù)可長(zhǎng)期處于無(wú)癥狀HBsAg攜帶狀態(tài)，因此從中篩選出肝硬化高危個(gè)體并實(shí)施個(gè)體化預(yù)防措施，才是經(jīng)濟(jì)而有效的乙肝肝硬化預(yù)防策略。基于臨床危險(xiǎn)因素難以定量預(yù)測(cè)慢性HBV感染者肝硬化發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。單核苷酸多態(tài)性（SNP）占人類(lèi)可遺傳變異的90％以上，是目前詮釋疾病遺傳易感性最好的遺傳標(biāo)記，可用于疾病風(fēng)險(xiǎn)的定量預(yù)測(cè)。遺傳背景差異可能是慢性HBV感染者肝

2、硬化發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)高低的重要原因。乙肝肝硬化屬多基因病，必須篩選出一組相關(guān)SNP才能有效地判斷個(gè)體的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。本研究的目的就是對(duì)乙肝肝硬化發(fā)生過(guò)程中各個(gè)環(huán)節(jié)相關(guān)的多個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行分析，探討它們與肝硬化易感性的關(guān)系，同時(shí)建立數(shù)學(xué)模型對(duì)慢性HBV感染者的肝硬化發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行個(gè)體化的分子定量預(yù)測(cè)。目前尚未見(jiàn)乙肝肝硬化易感性相關(guān)的多位點(diǎn)基因多態(tài)性的系統(tǒng)分析及相應(yīng)的分子預(yù)測(cè)模型研究報(bào)道。 方法：本研究采用成組病例對(duì)照研究設(shè)計(jì)方案，病例組為乙

3、肝肝硬化患者，對(duì)照組為無(wú)癥狀HBsAg攜帶者。選擇11個(gè)基因的17個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)（IL-1A-889C/T、IL-1B+3953C/T和-511C/T、IL-10-592A/C、IFN-γ+874T/A和+2109A/G、TNF-α-308G/A和-238G/A、CD14-159C/T、CTLA-4-318C/T、MEHTyr113His和-613C/T、GSTM1null/normal、MMP-9-1562CT、ER1+29T/C、AG

4、T-20A/C和-6A/G）進(jìn)行分析。采取酚-氯仿法抽提患者血凝塊基因組DNA。采用PCR-RFLP或PCR-SSP技術(shù)對(duì)各基因位點(diǎn)進(jìn)行基因型分析。計(jì)算不同組別的基因型和等位基因頻率。單因素和多因素非條件Logistic回歸分析觀察各基因型和等位基因與乙肝肝硬化發(fā)生的相關(guān)性及其強(qiáng)度（OR值）。采用多因素Logistic逐步回歸分析篩選獨(dú)立的相關(guān)基因型或等位基因，建立乙肝肝硬化發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的分子預(yù)測(cè)模型，并對(duì)模型的預(yù)測(cè)效率進(jìn)行評(píng)價(jià)。

5、結(jié)果：共有323例患者入選本研究，男226例，女97例，平均年齡51歲。乙肝肝硬化組168例，HBsAg攜帶組155例。兩組間各年齡段例數(shù)構(gòu)成比以及按性別分層統(tǒng)計(jì)的兩組間各年齡段例數(shù)構(gòu)成比的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.143～0.241）?；蚨鄳B(tài)性與乙肝肝硬化易感性的研究結(jié)果如下： （1）基于總樣本的單因素分析顯示，IFN-γ+874T/A多態(tài)位點(diǎn)與乙肝肝硬化易感性相關(guān)，其中TT是保護(hù)基因型（OR=0.55，P＝0.039），

6、TA是易感基因型（OR=1.93，P＝0.025），A是易感等位基因（OR=1.82，P＝0.036）；IL-10-592A/C多態(tài)位點(diǎn)與乙肝肝硬化易感性弱相關(guān)（P＝0.057～0.077），其他多態(tài)位點(diǎn)無(wú)關(guān)（P>0.1）。多因素分析顯示ER1+29TC為易感基因型（OR=2.00，P＝0.024），ER1+29T等位基因、AGT-20AA基因型和C等位基因與乙肝肝硬化弱相關(guān)（P＝0.059～0.072）。 （2）基于男性樣本的

7、單因素分析顯示，IL-10-592A/C位點(diǎn)與男性乙肝肝硬化相關(guān)，其中AC是易感基因型（OR＝1.86，P＝0.042），AA基因型和C等位基因與肝硬化弱相關(guān)（P＝0.076）；IFN-γ+874T/A位點(diǎn)TA基因型也與男性乙肝肝硬化弱相關(guān)（P＝0.074）；其他多態(tài)位點(diǎn)無(wú)關(guān)（P>0.1）。多因素分析顯示IL-10-592A/C位點(diǎn)的AC基因型（OR＝3.79，P＝0.002）或A等位基因（OR＝3.70，P＝0.049）、C等位基因（

8、OR＝3.70，P＝0.049）均為危險(xiǎn)因素。 （3）基于女性樣本的單因素分析顯示，ER1+29T/C多態(tài)位點(diǎn)與女性乙肝肝硬化易感性相關(guān)，其中TC為易感基因型（OR＝3.28，P＝0.006），T為易感等位基因（OR＝3.10，P＝0.013），CC為保護(hù)基因型（OR＝0.32，P＝0.013）；IL-1B+3953C/T位點(diǎn)和MEH-613C/T位點(diǎn)與女性乙肝肝硬化易感性弱相關(guān)（P＝0.076-0.089），其他多態(tài)位點(diǎn)無(wú)關(guān)（

9、P>0.1）。多因素分析顯示危險(xiǎn)基因型和等位基因有ER1+29 TC基因型（OR=5.33，P=0.019）或T等位基因（OR=7.63，P=0.017）、CTLA-4-318CT基因型（OR=8.84，P=0.017）或T等位基因（OR=6.33，P=0.031）、IFN-γ+2109 AA基因型（OR=4.38，P=0.032），保護(hù)性基因型或等位基因有IL-1B+3593 CT基因型（OR=0.076，P-0.036）或T等位基因

10、（OR=0061，P=0.026）、IFN-γ+2109 G等位基因（OR=0.174，P=0.012）。 （4）基于男女混合樣本、男性樣本和女性樣本的基因多態(tài)性檢測(cè)數(shù)據(jù)，能分別建立起3個(gè)相應(yīng)的乙肝肝硬化風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型。3個(gè)模型對(duì)各自的建模病人的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率分別為70.1％、69.3％和79.4％，對(duì)各自對(duì)應(yīng)的全部病人的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率分別為67.1％、67.5％和77.9％。以各模型對(duì)所對(duì)應(yīng)的全部病人的預(yù)測(cè)概率值繪制ROC曲線(xiàn)，曲線(xiàn)下面

11、積分別為0.692、0.670和0.813。 結(jié)論：根據(jù)上述研究結(jié)果得出結(jié)論如下： （1）所檢測(cè)的多個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)中，只有少數(shù)與慢性HBV感染者肝硬化易感性有關(guān)，多數(shù)關(guān)聯(lián)不強(qiáng)或不相關(guān)； （2）與乙肝肝硬化相關(guān)的基因多態(tài)性主要集中在免疫相關(guān)基因和雌激素受體α基因，尤其是細(xì)胞因子基因； （3）男性與女性患者乙肝肝硬化易感性相關(guān)基因多態(tài)性位點(diǎn)有所不同，男性主要涉及細(xì)胞因子基因，女性患者除細(xì)胞因子基因外，還涉及