人胎盤組織中間充質(zhì)干細胞的定位及其生物學特性.pdf

1、目的：從胎盤組織中分離培養(yǎng)獲得間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells， MSCs)已成為干細胞研究領(lǐng)域的一大熱點。MSCs在胎盤的分布并不均衡，如何取材直接影響到胎盤問充質(zhì)干細胞(placenta derived mesenchymal stem cells，PMSCs)在體外的有效獲取及擴增。目前尚無特異性的標記物可用于成體MSCs的識別。本實驗旨在利用一些通用的MSCs標記物，探索MSCs在人胎盤的分布規(guī)律，并在

2、此基礎(chǔ)上通過分組分離培養(yǎng)．PMSCs，觀察細胞生物學的特性，初步驗證其規(guī)律，為MSCs的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用奠定良好的基礎(chǔ)。 方法：取無指征剖宮產(chǎn)之足月健康產(chǎn)婦的新鮮胎盤組織，按中央帶(A)、中間帶(B)和邊緣帶(C)、絨毛板層(a)、中間層(b)和基底板層(c) 分為九組：Aa、Ab、Ae、Ba、Bb、Be、Ca、Cb、Cc，連續(xù)切片，以CDl66、CD44、CD29分別做免疫熒光和免疫組化染色。顯微鏡下觀察陽性細胞分布區(qū)域，采

3、用HPIAS-1000彩色病理圖象分析系統(tǒng)進行圖象分析，檢測陽性細胞區(qū)域的光密度值(OD)，以平均光密度值作為衡量表達強弱的標準。所測數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進行分析。再按上述分組取材分離培養(yǎng)PMSCs，觀察各組細胞增殖情況有無差異，進一步驗證上述標記物定位的可靠性；同時檢測所培養(yǎng)細胞的表面抗原，誘導傳代后的細胞向神經(jīng)元樣細胞分化，證實其具有MSCs的特點。 結(jié)果：(1)首次證實3個標記物CDl66、CD44、CD29陽性表達細胞的

4、分布情況較一致，主要集中于血管內(nèi)皮下及血管附近間質(zhì)內(nèi)，胎盤中央帶中間層(Ab)陽性細胞較集中，陽性表達的強度較強，其OD值與其它組相比差異有顯著性(P＜0．05)，邊緣帶陽性細胞稀少，陽性表達的強度較弱；(2)分組分離培養(yǎng)PMSCs結(jié)果顯示：在相同處理方法下和相同條件培養(yǎng)基中，各組間細胞增殖情況有差異，其中Ab組生長速率和細胞數(shù)量的增加較其它組顯著；(3)流式細胞儀檢測表面抗原表明，培養(yǎng)所獲細胞表達CDl66、CD44、CD29、CDl