胃蛋白酶酶解酪蛋白制備酪啡肽的研究.pdf

1、本文采用試驗(yàn)方法對(duì)胃蛋白酶酶解酪蛋白制備酪啡肽進(jìn)行了研究，本次試驗(yàn)主要由三個(gè)部分組成。第一部分，酪啡肽生成最佳水解條件的確立。首先通過(guò)單因素試驗(yàn)研究了底物濃度，酶濃度，溫度和PH對(duì)水解的影響，并依據(jù)水解度的差異，選取了單因素最佳條件。而后選取四因素三水平正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)最佳酶解進(jìn)行進(jìn)一步探討，并根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果結(jié)合實(shí)際因素得出最佳試驗(yàn)條件。得到最佳條件后，繼續(xù)研究水解時(shí)間與水解度的關(guān)系，以水解時(shí)間0.5h-3.5h為限制備樣品一組7個(gè)。

2、 第二部分，柱層析條件的確立與樣品的分離。本部分首先根據(jù)試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)產(chǎn)物的特點(diǎn)，結(jié)合凝膠介質(zhì)的性質(zhì)選擇交聯(lián)葡聚糖凝膠作為分離介質(zhì)。選擇均一胃蛋白酶酶解樣品對(duì)于紫外檢測(cè)波長(zhǎng)，洗脫緩沖液，柱層高度，洗脫流速等因素進(jìn)行比較，對(duì)分離圖譜進(jìn)行分析并確立各因素最佳選擇。在此優(yōu)化條件下將標(biāo)準(zhǔn)品上柱，用緩沖液以穩(wěn)定的速度進(jìn)行洗脫，根據(jù)適當(dāng)?shù)南疵擉w積測(cè)出其吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。隨后對(duì)前一部試驗(yàn)制備的水解樣品進(jìn)行分離，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)判斷洗脫峰的分子量，并以此為