蛔蟲體腔液對3T3-L1細胞增殖分化影響及其機制的研究.pdf

1、本試驗主要探討蛔蟲體腔液(Ascaris body cavity fluid,ABF)對小鼠3T3-L1前脂肪細胞增殖、分化及凋亡的影響,以揭示蛔蟲體腔液對機體脂類代謝的作用機理。試驗方法:收集蛔蟲體腔液,將起始濃度為3200μg/mL的蛔蟲體腔液分別稀釋為3000μg/mL、2000μs/mL、1000μg/mL、800μg/mL、600μg/mL、400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、10μg/mL作

2、為試驗材料。利用3T3-L1細胞建立試驗模型,分別設立細胞增殖試驗、凋亡試驗、分化試驗和PPARγ mRNA表達試驗。增殖試驗組:取對數(shù)生長期的3T3-L1細胞常規(guī)消化計數(shù),準確將細胞接種于96孔培養(yǎng)板中,1d后將各濃度的蛔蟲體腔液分別接種于細胞板繼續(xù)培養(yǎng),分別在24h、36h、48h時用MTT法檢測細胞活性,觀察不同濃度的蛔蟲體腔液在不同時間段對3T3-L1細胞增殖的影響;凋亡試驗組:細胞分化過程中設置蛔蟲體腔液1000μg/mL組和

3、空白對照組,36h后分別收集各組細胞,用流式細胞儀檢測細胞晚期凋亡率。分化試驗組:將處于對數(shù)生長期的細胞進行誘導分化,設置3000μg/mL ABF組、2000μg/mL ABF組、1000μg/mL ABF組、500μg/mL ABF組、100μg/mL ABF組、50μg/mL ABF組、10μg/mL ABF組,分化過程中分別加入對應濃度的ABF,分化結束后進行油紅O染色,在510nm波長測吸光度;PPARγ mRNA表達試驗組:

4、細胞分化過程中設置1000μg/mL ABF組、100μg/mLABF組和對照組,分化結束后提取細胞RNA,用RT-PCR方法檢測PPARγ、GAPDHmRNA的相對表達。
　　 試驗結果如下:
　　 1.細胞增殖結果:相同作用時間,ABF對3T3-L1細胞增殖的抑制作用與濃度成正比;當濃度一定時,ABF對3T3-L1細胞的抑制作用隨時間的增加而增大。
　　 2.細胞凋亡檢測結果:在3T3-L1分化過程中加入10

5、00μg/mLABF,細胞的凋亡率由正常分化組的15.99％提高到25.87%,可顯著提高細胞凋亡率。
　　 3.細胞分化染色結果:高濃度的ABF(2000μg/mL、1000μg/mL、500μg/mL)可以極顯著降低胞內(nèi)脂肪的產(chǎn)生量(P＜0.01),胞內(nèi)產(chǎn)脂量分別為對照組的26.5%、55.5%和81.5%。低濃度(100μg/mL、50μg/mL、10μg/mL)的ABF與對照組相差不明顯,甚至還高于對照組,但差異無統(tǒng)計學

6、意義(P＞0.05)。
　　 4.PPARγ mRNA表達結果:前脂肪細胞3T3-L1誘導分化過程中加入1000μg/mLABF,細胞PPARγmRNA表達量明顯降低(P＜0.01),為對照組的57.6%,而10μg/mL的ABF對PPARγmRNA表達量的影響與對照組相比,差異不顯著(P＞0.05)。
　　 結論:
　　 1.ABF干預脂質(zhì)代謝可能與抑制3T3-L1細胞的增殖密切相關。
　　 2.ABF