藍狐多重感染的病原學及主要病原的分子生物學特性研究.pdf

1、近年來，隨著我國毛皮動物規(guī)?；B(yǎng)殖業(yè)的不斷擴大，由病原細菌所引起的狐類感染，常表現(xiàn)出流行面廣、發(fā)病率和死亡率高的特點。傳染性疾病，尤其是細菌性疾病的多重感染發(fā)生日益頻繁、越來越普遍，給毛皮動物養(yǎng)殖生產(chǎn)帶來了較大的經(jīng)濟損失，嚴重地威脅到毛皮動物養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展。2006-2007年間，山東6個地區(qū)不同狐群養(yǎng)殖場養(yǎng)殖的母狐出現(xiàn)空懷、流產(chǎn)、出血性肺炎等癥狀病變類似的疫情。為了進一步探討引起這場規(guī)?；鼒霭l(fā)生疾病的原因，本研究開展了流行病學調(diào)查

2、，病原學檢查，細菌多重感染的狀況分析及間接熒光抗體檢測等方法的建立，并對其主要病原進行16SrRNA序列測定和系統(tǒng)進化性分析，為規(guī)?；N狐場多重感染的疾病診斷與防治提供了理論依據(jù)。 本研究共分三部分： 一、規(guī)?；{狐養(yǎng)殖場細菌感染的病原學檢測及其多重感染的狀況分析2006-2007年間，山東6個地區(qū)不同狐群養(yǎng)殖場養(yǎng)殖的母狐出現(xiàn)空懷、流產(chǎn)、出血性肺炎等癥狀病變類似的疫情，給養(yǎng)殖場造成了巨大經(jīng)濟損失。通過對其養(yǎng)殖場(共計飼養(yǎng)

3、藍狐2.2萬余只)進行流行病學調(diào)查，對送檢的236只病死藍狐進行細菌和病毒學檢查，及犬瘟熱(CDV)、犬細小病毒(CPV)快速診斷試紙條的檢測，從被檢病料中主要分離到綠膿桿菌(86％)、大腸桿菌(34.3％)、沙門氏菌(25.8％)和普通變形桿菌(8.5％)四種病原菌，病毒檢查與試紙條檢測皆為陰性，人工感染小鼠的致病性試驗結果表明四種病原菌皆為致病菌：通過細菌分離率及共感染率的統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)病狐群同時存在大腸桿菌、沙門氏菌、普通變形桿菌

4、和綠膿桿菌的二重感染(45.8％)、三重感染(3.8％)、甚至四重感染(0.4％)的情況，尤其是以綠膿桿菌感染為主的多重感染，已成為影響山東地區(qū)毛皮動物養(yǎng)殖疫病的主要病因之一。 二、藍狐綠膿桿菌主要血清學診斷方法的建立與臨床應用取上述試驗所分離的主要病原菌綠膿桿菌的代表菌株ZB4，分別制備全菌(OK)抗原及菌體(O)抗原，經(jīng)分別強化免疫接種家兔制備高效價抗血清，進行與待檢菌株的玻片凝集反應、免疫熒光抗體反應(IFA)及瓊脂擴散試

5、驗(AGP)等方面的免疫檢驗，結果在同種細菌間的熒光抗體檢驗顯示出了特異的黃綠色熒光反應；玻片凝集反應中出現(xiàn)了特異凝集；在瓊脂擴散檢驗中出現(xiàn)特異的免疫沉淀線。本研究建立了藍狐綠膿桿菌玻板凝集、IFA、AGP的快速診斷方法，補充了傳統(tǒng)細菌學檢測的方法，為這些病原的快速、準確診斷奠定了基礎。 三、藍狐綠膿桿菌ZB4株16SrRNA基因的序列測定及系統(tǒng)進化分析病原學研究結果表明綠膿桿菌是影響規(guī)?；{狐養(yǎng)殖場多重感染的主要病原之一，為進

6、一步研究其分子生物學特性，本試驗利用原核生物16SrRNA基因通用引物對分離純化的藍狐致病性綠膿桿菌菌株ZB4進行16SrRNA基因的克隆及序列分析。采用DNAstar軟件將獲得的序列與選取的核苷酸同源性較高的序列進行同源性比對，采用MEGA(3.1)軟件生成同源序列的進化樹。結果顯示該菌株與假單胞菌屬的9個代表菌株的同源性均很高，在98.7％～99.2％之間，在所構建的系統(tǒng)進化樹上，ZB4菌株與綠膿桿菌(Pseudomonasaeru