蝴蝶蘭屬EST-SSR標(biāo)記在蘭屬中的通用性研究.pdf

1、EST-SSR標(biāo)記是近年來(lái)發(fā)展的基于表達(dá)序列標(biāo)簽數(shù)據(jù)庫(kù)的一種新型分子標(biāo)記。廣泛地應(yīng)用在遺傳多樣性分析、親緣關(guān)系鑒定、遺傳圖譜的構(gòu)建、比較基因組學(xué)等方面。研究 EST-SSR標(biāo)記在物種間的通用性，可以減少引物開(kāi)發(fā)成本，進(jìn)而更好地應(yīng)用于物種的遺傳育種工作。蘭屬植物在我國(guó)栽培歷史悠久，具有極高的觀賞價(jià)值，而國(guó)蘭的育種工作還主要停留在對(duì)野生種的選育上，品種改良進(jìn)展緩慢，人工育種工作開(kāi)展較少。目前，在NCBI上登錄了8845條蝴蝶蘭屬EST序列，

2、資源很豐富，利用蝴蝶蘭屬EST資源，探索蝴蝶蘭屬EST-SSR標(biāo)記在蘭屬上的通用性，加速開(kāi)發(fā)物種間的有效 EST-SSR標(biāo)記，為蘭屬的遺傳育種、品種鑒定等奠定基礎(chǔ)工作。本研究根據(jù)已有報(bào)道，選取136對(duì)蝴蝶蘭 EST-SSR引物，分別用23個(gè)春蘭，11個(gè)蕙蘭，10個(gè)建蘭，10個(gè)寒蘭和10個(gè)墨蘭品種基因組DNA作模板，進(jìn)行 PCR擴(kuò)增和擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性分析，取得的結(jié)果如下：
　?。?）136對(duì)蝴蝶蘭EST-SSR引物，在供試的春蘭、蕙

3、蘭、建蘭、寒蘭、墨蘭中，分別有20、23、21、12、15對(duì)擴(kuò)增出預(yù)期產(chǎn)物；有10、12、10、9、7對(duì)引物分別在春蘭、蕙蘭、建蘭、寒蘭、墨蘭中擴(kuò)增產(chǎn)物顯示多態(tài)性。
　　（2）選用有多態(tài)性的引物對(duì)五大類國(guó)蘭品種進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，有4對(duì) EST-SSR引物在五大類國(guó)蘭品種間均有多態(tài)性，這4對(duì)引物在64個(gè)國(guó)蘭品種上共檢測(cè)出26個(gè)等位基因，每對(duì)引物檢測(cè)到的等位變異數(shù)目4~9個(gè)，平均6.5個(gè)；SSR引物多態(tài)性信息量(PIC)變化范圍為0.

4、210~0.527，平均為0.398。
　　（3）利用這4對(duì)EST-SSR引物對(duì)64份蘭屬品種進(jìn)行UPGMA聚類分析，結(jié)果表明：64個(gè)國(guó)蘭品種間的遺傳相似系數(shù)在0.520~0.980之間，在遺傳相似系數(shù)為0.74時(shí)，64個(gè)國(guó)蘭品種可以分為四大類，第一大類（Ⅰ類），共34個(gè)材料，又可分為兩大亞類：一類（A類）主要為春蘭品種，另一類（B類）主要是蕙蘭品種。第二大類（Ⅱ類），共有13個(gè)材料，其中10個(gè)建蘭品種，3個(gè)寒蘭品種。第三大類（Ⅲ