ADAMDEC1對人腦膠質(zhì)瘤U87細胞生物學行為的影響.pdf

1、目的：研究ADAMDEC1（解聚素金屬蛋白酶家族癸蛋白1）對人腦膠質(zhì)瘤U87細胞的增殖、黏附、侵襲、遷移和凋亡等細胞生物學行為的影響。
　　方法：1.從上海吉凱基因公司提供的三種可能有效的慢病毒（分別攜帶TACCACGAAACCTGAGAACAT、CTGATAAGAAGCTTTGTGTTT、TCCCAGGAATCTTGTGAATTT三個基因片段）中篩選能夠下調(diào)U87細胞ADAMDEC1表達的慢病毒：(1)分別用三種慢病毒感染U87

2、細胞，篩選最適復感染指數(shù)值(MOI)，通過觀察GFP熒光的表達情況來判定轉(zhuǎn)染效率;(2)采用Real-time PC R法分別檢測三種慢病毒感染后U87細胞ADAMDEC1mRNA的表達情況，并對三種慢病毒感染后U87細胞ADAMDEC1mRNA的表達差異進行分析比較，篩選出能夠下調(diào)U87細胞ADAMDEC1表達的慢病毒;2.實驗組(ADAMDEC1-RNAi)人腦膠質(zhì)瘤U87細胞通過用篩選出的能夠下調(diào)U87細胞ADAMDEC1表達的慢

3、病毒在最適復感染指數(shù)的條件下進行感染來下調(diào)ADAMDEC1的表達，對照組(CONTROL-RNAi)用陰性對照慢病毒（攜帶TTCTCCGAACGTGTCACGT基因片段）在最適復感染指數(shù)的條件下進行感染，采用Western blot法檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的U87細胞ADAMDEC1蛋白的定性、定量表達情況，并對轉(zhuǎn)染后U87細胞ADAMDEC1蛋白的表達差異進行分析比較;3.采用CCK-8法檢測兩組細胞增殖及黏附能力的差異，并對差異進行分析比較;

4、4.采用Transwell法檢測兩組細胞侵襲及遷移能力的差異，并對差異進行分析比較;5.采用流式細胞技術(shù)檢測兩組細胞凋亡情況的差異，并對差異進行分析比較。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量數(shù)據(jù)以(x)±s表示，兩組間差異采用t檢驗分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：1.通過觀察GFP熒光的表達情況可得知：上海吉凱基因公司提供的攜帶特異性基因片段的慢病毒能夠感染人腦膠質(zhì)瘤U87細胞，且最適復感染指數(shù)為2

5、0;2.Real-time PCR結(jié)果顯示：攜帶TCC CAGGAATCTTGTGAATTT基因片段的慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤U87細胞后，與對照組相比，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后的U87細胞的ADAMDEC1-RNAi mRNA表達水平均明顯降低(P＜0.01)，即TCCCAGGAATCTTGTGAATTT基因片段為下調(diào)ADAMDEC1基因表達的有效片段;3.CCK-8檢測結(jié)果顯示：攜帶有效基因片段的慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤U87細胞后，與對照組相比，下調(diào)A

6、DAMDEC1表達后的U87細胞的增殖能力下降(P＜0.05)，黏附能力明顯受到抑制(P＜0.01);4.Transwell檢測結(jié)果顯示：攜帶有效基因片段的慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤U87細胞后，與對照組相比，下調(diào)ADAMDEC1表達后的U87細胞的侵襲和遷移能力均明顯下降(P＜0.01);5.流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示：攜帶有效基因片段的慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤U87細胞后，與對照組相比，下調(diào)ADAMDEC1表達能夠促進U87細胞的凋亡(P＜0.0