沒(méi)食子酸對(duì)二甲基亞硝銨致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究沒(méi)食子酸(Gallic acid，GA)對(duì)二甲基亞硝胺(Dimethy-lnitrosamine，DMN)所致急性肝損傷的保護(hù)作用并探索其對(duì)肝臟細(xì)胞代謝二相酶的誘導(dǎo)作用。
　　 方法：將50只健康雄性昆明種小鼠隨機(jī)分為5組：(A)正常對(duì)照組；(B)沒(méi)食子酸正常給藥組(100mg/kg);(C)二甲基亞硝銨肝損傷組；(D)低劑量沒(méi)食子酸預(yù)處理組(50mg/kg);(E)高劑量沒(méi)食子酸預(yù)處理組(100mg/kg)。各組小鼠

2、均連續(xù)灌胃三天，一天兩次，最后一次灌胃結(jié)束后12h，腹腔注射DMN25mg/kg。24h后摘除小鼠眼球采集血液，并留取肝臟標(biāo)本。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)采用分光光度法分別測(cè)定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine Aminotransferase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate Aminotransferase，AST)的活性；肝組織勻漿中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutath

3、ione Peroxidase，GSH-px)、谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(Glutathione s-transferase，GST)的活性及丙二醛(Malondialdehyde，MDA)、還原型谷胱甘肽(Reduced Glutathione，GSH)的含量。光鏡下觀察肝臟石蠟切片的組織形態(tài)學(xué)變化，評(píng)定各組動(dòng)物的病理?yè)p傷程度。采用免疫組織化學(xué)法、免疫印跡法檢測(cè)肝臟胞漿內(nèi)血紅素氧合酶-1(Heme Oxygenase-1，HO-1)、谷胱甘

4、肽巰基轉(zhuǎn)移酶(Glutathione s-transferase Alpha3，GSTA3)及胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子 Nrf2(NF-E2-related factor2)的蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1．DMN25mg/kg腹腔注射24h后可出現(xiàn)急性肝損傷，具體表現(xiàn)在：(1)血清中轉(zhuǎn)氨酶AST、ALT活性顯著升高(P＜0.01，P＜0.01)。(2)組織損傷程度明顯，鏡下觀察可見(jiàn)肝竇擴(kuò)張，伴有大規(guī)模出血性壞死及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)

5、。(3)肝勻漿中SOD、GSH-px活性降低(P＜0.01，P＜0.01)，提示肝臟抗氧化能力下降；MDA水平上升(P＜0.01)，GSH含量減少(P＜0.01)，表明DMN可導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化及谷胱甘肽耗竭。
　　 2．GA預(yù)處理可對(duì)DMN引起的肝損傷產(chǎn)生保護(hù)作用，并呈現(xiàn)劑量依賴性，與損傷組相比：(1)血清中轉(zhuǎn)氨酶AST、ALT活性顯著下降(P＜0.01，P＜0.01)。(2)組織損傷程度減輕，鏡下觀察可見(jiàn)出血減少，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)較

6、輕。(3)肝臟抗氧化能力升高，脂質(zhì)過(guò)氧化程度降低，表現(xiàn)為SOD、GSH-px活性增強(qiáng)(P＜0.05，P＜0.05)，MDA水平下降(P＜0.05)，GSH含量增加(P＜0.05)。(4)肝臟解毒能力提高，體現(xiàn)在GST活性水平提高(P＜0.01)。
　　 3．GA對(duì)正常小鼠無(wú)毒性反應(yīng)，表現(xiàn)在肝功水平無(wú)顯著性差異，組織形態(tài)正常，脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)未發(fā)生。而且GA可顯著提高小鼠的抗氧化能力，與正常對(duì)照組相比，GA正常給藥組SOD、GSH-

7、px活性增強(qiáng)(P＜0.01，P＜0.01)，還原型GSH含量增加(P＜0.01)，GST活性增強(qiáng)(P＜0.01)。
　　 4．蛋白表達(dá)情況：(1)與正常對(duì)照組相比，損傷組肝細(xì)胞核內(nèi)Nrf2表達(dá)增加，胞漿中HO-1、GSTA3表達(dá)增加，表明DMN經(jīng)肝臟代謝可產(chǎn)生大量活性氧，促進(jìn)了Nrf2的核易位，進(jìn)而上調(diào)了HO-1、GSTA3在胞漿中的表達(dá)，體現(xiàn)出機(jī)體在針對(duì)氧化應(yīng)激反應(yīng)時(shí)存在自我保護(hù)機(jī)制。(2)與損傷組相比，GA預(yù)處理組(100m

8、g/kg)的Nrf2、HO-1、GSTA3表達(dá)增加，為各組表達(dá)最高，表明GA可在活性氧基礎(chǔ)上進(jìn)一步促進(jìn)Nrf2的核易位和二相酶的表達(dá)，增強(qiáng)肝保護(hù)作用。(3)與正常對(duì)照組相比，正常給藥組(100mg/kg)Nrf2、HO-1、GSTA3的表達(dá)增加，說(shuō)明在無(wú)病理?yè)p傷時(shí)，GA可提升肝臟的解毒能力。
　　 結(jié)論：
　　 1．正常情況下短期應(yīng)用沒(méi)食子酸可提高肝臟抗氧化能力及二相解毒能力。
　　 2．DMN具有顯著肝毒性，預(yù)