α-硫辛酸對氧化應激下大鼠睪丸支持細胞保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：探討α-硫辛酸對氧化應激下大鼠睪丸支持細胞的氧化損傷是否具有保護作用，并通過細胞骨架蛋白表達角度研究α-硫辛酸對氧化應激下大鼠睪丸支持細胞的保護作用途徑及相關的機制。
　　方法：取大鼠睪丸進行支持細胞原代培養(yǎng)，并通過細胞形態(tài)學進行細胞鑒定。將各種濃度的H2O2(0，50，100，200，400，800，1600μmol/L)誘導體外培養(yǎng)的大鼠睪丸支持細胞氧化損傷，并通過CCK-8法檢測睪丸支持細胞的活性及DCFH-DA熒光探

2、針法檢測細胞內活性氧水平進行睪丸支持細胞氧化損傷模型的鑒定。將原代培養(yǎng)大鼠睪丸支持細胞按以下四組進行處理：對照組，即正常細胞培養(yǎng)，不加任何處理因素：α-LA組，僅加入含終濃度200μmol/Lα-LA的培養(yǎng)基；H2O2組，即加入含終濃度400μmol/H2O2的培養(yǎng)基；α-LA+H2O2組，即預先加入含終濃度200μmol/L，α-LA孵育4h后再加入含終濃度400μmol/L H2O2的培養(yǎng)基。各組處理12h后進行實驗檢測。采用CCK

3、-8法檢測各組睪丸支持細胞的活性及DCFH-DA熒光探針法檢測各組睪丸支持細胞內活性氧水平；酶活性檢測試劑盒檢測抗氧化酶活性；免疫組織化學法、蛋白質免疫印跡法檢測波形蛋白及微管蛋白的表達。
　　結果：大鼠睪丸支持細胞經分離、接種后，細胞貼壁生長，3至4天后細胞呈現(xiàn)單層融合狀態(tài)生長。H2O2損傷組較正常對照組，細胞活力有所降低，并隨H2O2濃度的升高，細胞活力降低明顯，同時，細胞內ROS水平上升，H2O2作用于細胞致氧化損傷的適合濃

4、度為400μmol/L。與對照組比較，H2O2刺激后支持細胞存活率下降，具有統(tǒng)計學意義(P<0.05，)；細胞內ROS水平上升(P<0.05)；總抗氧化能力、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和谷胱甘肽還原酶的活性均降低(P<0.05)；波形蛋白及微管蛋白的表達也明顯降低(P<0.05)，而α-LA干預后可提高細胞存活率，降低細胞內ROS水平，提高抗氧化酶的活性，并提高波形蛋白及微管蛋白的表達。
　　結論：氧化應激可導致大鼠睪丸支持細胞波