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文檔簡介
1、浙江理工大學碩士學位論文家蠶親環(huán)蛋白A的表達與亞細胞定位研究姓名:唐田娟申請學位級別:碩士專業(yè):生物化學與分子生物學指導教師:張耀洲20090301浙江理工大學碩士學位論文AbstractCyclophilin,whichisfoundasakytoplasmfamilyproteinin1984ItwasnamedforbindingwithcyclosporineA(CsA)CsAisanimportantmedicinetopro
2、tectrejectreactioninexplantationofhumanorgantransplantationCsAmayblockitsactivenessbydisturbtheTcellssignalconductionCsAdisplayimmunosuppressionfunctiononlywhenformCsA—CyclophilincomplexwithinterestproteinCyclophilinAcco
3、rdingtothelarge—scaleeDNAsequencingofsilkwormpupae,aBombyxmoriCyclophilinAeDNAwasidentifiedafterBlastbasedonNCBIdatabase,ofwhichtheacw七ssionnumberWasAB206402ThisORFcontained498bp,encodingapolypeptideof165aminoacidswithap
4、redictedmolecularweightof1796kDaAfterclonedintopET一28aandexpressedinEcoliBL21(DE3),theBmCyPAWasfusedwithHistagandpurifiedonchelatingcolumnsThemolecularweightofthisfusionproteinwas214100Da(Histagwasweightof356kDaandBmCyPA
5、wasweightof1796kDa),characterizedbymassspectrumafarlacingfurtherpurifiedon10RIFPLCThisresultprovedthatHistagBmCyPAWasexpressedintherightformThepurifiedfusionproteinWasusedtoimmunizeamaleNewZealandrabbitThenantiserumWasha
6、rvested,andlgGwaspreparedbyaffinitychromatographyusingimmobilizedproteinASometissuesofthefiRhinstarlarvae,suchashead,Malpighiantubule,epidermis,silkglands,seminalglands,gutfattybody,wereextractedandanalyzedbyWesternblott
7、ingTheresultshowedthatBmCyPAexistedinlarva’Sepidermis,gutheadMalpighiantubule,seminalglandsonthedecreaseHowevernonewasdetectedinlarvassilkglandsandfattybodyAndwegotthesimilarresultswhenwecarriedoutimmunohistochemistryana
8、lysiswiththetiP&instarlarvaandpupaAftercarryingoutsubcellularlocalizationaboutBmCyPA,wefoundthatitmainlyexistedincytoplasmWealsocomparedthequantityofBmCyPAmRNAindifferenttissuesofthefiRhinstarlarvaanddifferentstagesofsil
9、kwormTheseresultssuggestedthatBmCyPAselectivelyexpressedinsilkworm’Sheadgutepidermis,spiracleandMalpighiantubuleKeywordsBombyxmori;CyelophilinA;prokaryoticexpression;tissuelocalization;subcellularlocalizafion;realtimePCR
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