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文檔簡介
1、目的:探討高糖環(huán)境下ROS-AKT-mTOR信號軸在MC3T3-E1成骨細胞自噬和增殖、凋亡中的作用。
方法:將體外培養(yǎng)的MC3T3-E1成骨細胞分為正常對照組、NAC組、11.0mmol/L葡萄糖組、11.0mmol/L葡萄糖+NAC組、22.0mmol/L葡萄糖組、22.0mmol/L葡萄糖+NAC組、CQ組、22.0mmol/L葡萄糖+CQ組。采用DCFH-DA探針試劑盒檢測細胞內ROS水平;采用MTT法檢測細胞增殖;采
2、用Annexin V-FITC/PI試劑盒處理不同組別MC3T3-E1成骨細胞,并應用流式細胞術檢測細胞凋亡率;采用 Honchest33258染核,免疫熒光顯微鏡觀察細胞核形態(tài);應用Western Blot和免疫熒光法檢測細胞內蛋白表達。
結果:(1)11.0mmol/L和22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1成骨細胞凋亡率較正常對照組均顯著增加(P<0.01),且細胞凋亡率隨著葡萄糖濃度升高而增加,差異具有統(tǒng)計學意義
3、。(2)與正常對照組相比,11.0mmol/L葡萄糖組 MC3T3-E1成骨細胞增殖輕微下降(P>0.05),22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1成骨細胞增殖顯著降低(P<0.01),且細胞增殖能力隨著葡萄糖濃度升高而降低。(3)與正常對照組相比,11.0mmo/L葡萄糖組MC3T3-E1成骨細胞LC3B-II和Beclin1蛋白表達顯著增加,P62蛋白表達顯著下降;22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1成骨細胞LC3B-
4、II蛋白表達顯著下降(P<0.01),Beclin1和P62蛋白表達增加(P<0.01;P>0.05)。與正常對照組相比,CQ組MC3T3-E1成骨細胞LC3B-II蛋白表達增加(P<0.05)。與22.0mmol/L葡萄糖組和CQ組相比,22.0mmol/L葡萄糖+CQ組MC3T3-E1成骨細胞LC3B-II蛋白表達均顯著增加(P<0.01)。(4)與正常對照組相比,11.0mmol/L和22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1成
5、骨細胞胞內ROS水平均顯著增加(P<0.01),但無明顯濃度依賴性。NAC可顯著降低,MC3T3-E1成骨細胞胞內 ROS的生成,并改善高糖所致的凋亡增加、增殖下降和自噬水平上升。(5)與正常對照組相比,11.0mmol/L和22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1細胞p-AKT、p-mTOR蛋白表達下調,NAC可上調MC3T3-E1成骨細胞p-AKT、p-mTOR蛋白表達,差異具有統(tǒng)計學意義。
結論:(1)高糖環(huán)境下MC
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