酸環(huán)境對人髓核間充質(zhì)干細胞生物學活性的影響.pdf

1、目的:觀察不同程度酸性條件對成人髓核間充質(zhì)干細胞（NPMSCs）生物學活性的作用，發(fā)掘椎間盤的可能退變機制。
　　方法：篩選6例脊柱側(cè)凸需矯形手術患者，留取手術過程中摘除的6個PfirrmannⅠ級或Ⅱ級腰椎椎間盤，用膠原酶消化髓核組織，分離細胞，體外培養(yǎng)，觀察細胞形態(tài)。選擇培養(yǎng)的P2代細胞，運用流式細胞儀檢測間充質(zhì)干細胞等表面抗原標志物；使用分化誘導培養(yǎng)液誘導成骨、成軟骨、成脂細胞，2周后分別染色液對誘導的細胞染色，觀察細胞三系

2、分化能力。參照國際干細胞治療協(xié)會（ISCT）給出的間充質(zhì)干細胞（MSCs）的判定準則，綜合鑒定分離的細胞。使用不同pH值的培養(yǎng)基培養(yǎng) P2代細胞后，用CCK-8法檢測不同培養(yǎng)時間的細胞增殖能力，用流式細胞儀檢測不同pH培養(yǎng)基作用的細胞凋亡率，使用實時熒光定量（RT-PCR）檢測P2代細胞“干性”基因及酸離子通道家族蛋白基因表達情況。
　　結(jié)果：分離的 P0代細胞均貼培養(yǎng)瓶底壁生長。分離培養(yǎng) P2代細胞表面抗原檢測示高表達 CD90

3、、CD105、CD73，三者表達比例分別達96％、95％、94%以上，卻低表達 CD45、CD34、HLA-DR（均低于4%）。通過使用特殊染色劑染色結(jié)果表明實驗中分離得到的細胞均可向骨、脂肪及軟骨細胞方向分化。參照 ISCT制定MSCs的判定準則，認為這種細胞是NPMSCs。 CCK-8檢測結(jié)果示分離得到的細胞在不同pH培養(yǎng)液培養(yǎng)后1、3天不同組細胞吸光度差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；5天后各組細胞吸光度差異有統(tǒng)計學意義（P<0.

4、05），且吸光度隨 pH值降低而減小。凋亡率比較結(jié)果示 pH值7.4組的細胞凋亡率最小，各組有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。RT-PCR檢測示pH7.4組“干性”基因及酸離子通道蛋白基因最高，高于其余各組（P<0.05），基因表達量隨著培養(yǎng)液pH值減小而降低。
　　結(jié)論：不同層次的 pH酸環(huán)境條件下培養(yǎng)成人 NPMSCs3天增殖能力未見顯著變化，作用5天后可以看出低pH環(huán)境明顯抑制NPMSCs的增殖能力以及基因表達，加快細胞凋亡，而