srGAP2 F-BAR結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究.pdf

1、BAR結(jié)構(gòu)域超家族蛋白通過誘導(dǎo)膜的內(nèi)陷和突起在細(xì)胞經(jīng)歷的多種多樣的過程中都發(fā)揮著重要的作用這些過程包括細(xì)胞器生物發(fā)生,細(xì)胞分裂,細(xì)胞迀移,分泌和內(nèi)吞。BAR結(jié)構(gòu)域超家族可以分為三個不同的亞家族:“classical”BARs/N-BARs, F-BARs(Fes/CIP4 homology-BAR)和 I-BARs(Inverse-BAR)。經(jīng)典(Classical) BAR和F-BAR亞家族蛋白在網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用中誘導(dǎo)膜的內(nèi)陷,

2、而I-BAR亞家族蛋白Missing-in-metastasis(MIM)和IRSp53可以在體外和活細(xì)胞中誘導(dǎo)膜的突起,形成絲狀偽足(filopodia)。雖然srGAP2(slit-robo GTPase activating protein2)含有一個N端F-BAR結(jié)構(gòu)域,卻能通過引起膜的突起來調(diào)控神經(jīng)元的生長和迀移,這與I-BAR蛋白的功能存在相似之處。在本研究中,過表達(dá)srGAP2蛋白的F-BAR結(jié)構(gòu)域,并進(jìn)行純化和結(jié)晶。sr

3、GAP2 F-B A R結(jié)構(gòu)域蛋白晶體X射線衍射得到的分辨率為3.50 A,所屬空間群為P21,這些結(jié)果有利于srGAP2 F-BAR結(jié)構(gòu)域最終的結(jié)構(gòu)解析并最終解釋其誘導(dǎo)膜突起而不是膜內(nèi)陷的原因。本研究中還通過轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞獲得真核表達(dá)的Rab4,5,7,8,11;與原核表達(dá)的F-BAR-1-357和F-BAR-1-480蛋白(帶6xHisT a g)做N i柱pulldown,來探索R a b與F-B A R不同區(qū)段的結(jié)合性質(zhì)