雙順反子基因轉移體的構建及MAR對基因整合與表達的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、隨著轉基因技術的不斷發(fā)展，轉基因動物的安全性受到越來越多的關注，因此構建安全高效的表達載體是必要的。本實驗通過構建質粒載體pCAG-FSTN-IRES-AcGFP1-polyA，制備了無質粒骨架序列、無抗性標記的雙順反子基因轉移體CAG-FSTN-IRES-AcGFP1-polyA，以及兩端帶有核基質結合序列(matrix attachment regions,MAR)的雙順反子基因轉移體MAR-CAG-FSTN-IRES-AcGFP1

2、-polyA-MAR，并對這三種載體的轉染、整合與表達功能進行了比較分析。結果表明，無載體骨架序列的雙順反子基因轉移體仍能正常的行使基因轉移、整合、表達等功能;在整合效率的比較中，帶有MAR序列的雙順反子基因轉移體明顯好于其它兩組;而且，帶有MAR序列的雙順反子基因轉移體的表達水平也明顯優(yōu)于其它兩組。
　　另外，我們還進行了這三種載體轉基因單克隆細胞的篩選工作，最終獲得了8株穩(wěn)定建系的MAR雙順反子基因轉移體的單克隆細胞，并對這些

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