驅動蛋白Oocyte-G1基因的克隆與功能研究.pdf

1、哺乳動物發(fā)育過程中生殖系統(tǒng)分泌的多種細胞因子相互作用,形成一個復雜的信號網絡,對其發(fā)育起著調控作用。近年來,大量與生殖系統(tǒng)發(fā)育相關的細胞因子相繼被發(fā)現。我們在研究與小鼠卵巢發(fā)育相關基因的過程中,通過差異顯示PCR技術(DDRT-PCR),篩選到一個新的小鼠Kinesin超家族成員,命名為Oocyte-G1。該基因在不同年齡小鼠卵巢中具有差異表達,其開放閱讀框為2997bp,編碼一個含有997個氨基酸、分子量約110kD的蛋白質,其mRN

2、A長度約3.6kb,廣泛存在于小鼠卵巢、肺、腎臟、睪丸和大腦組織中。Oocyte-G1在小鼠卵巢中,主要分布于卵母細胞及其周圍的一些顆粒細胞中,在15、40日齡時表達量達到峰值,在5、10、20以及120日齡時低水平表達。
　　 為進一步研究Oocyte-G1的功能,我們分別在體外和體內進行了相關實驗。TUNEL與流式細胞凋亡檢測實驗結果均顯示:在細胞內過量表達Oocyte-G1,能引起細胞凋亡率顯著增高。隨后以含有Oocyte

3、-G1外源表達片段的逆轉錄病毒顆粒為載體,構建了Oocyte-G1過表達小鼠模型,通過PCR與Southern blot技術篩選得到Oocyte-G1過表達小鼠。動物實驗表明:雄性Oocyte-G1過表達模型小鼠生精小管內的生殖細胞凋亡率也顯著增高。同時還發(fā)現Ooyte-G1的過量表達還能延緩小鼠發(fā)育,表現為體型及內部器官發(fā)育遲緩、生殖器官成熟時期推遲。導致雄性小鼠生殖腺發(fā)育遲緩,影響生精過程；雌性小鼠卵泡發(fā)育也受到影響,使6周齡小鼠不

4、能形成成熟卵泡。這種發(fā)育遲緩現象,在隨后的發(fā)育過程中能逐漸恢復。
　　 為探索Oocyte-G1功能的產生機制,我們使用免疫共沉淀方法對多個參與細胞增殖、凋亡或分化的細胞因子進行了篩選,結果顯示Oocyte-G1能與Caspase-3相互結合。免疫熒光定位結果顯示,這種相互作用發(fā)生在細胞核的周圍區(qū)域。在體外培養(yǎng)的細胞中過量表達Oocyte-G1,能引起Caspase-3的表達量顯著增加,而Oocyte-G1沉默會引起Caspas

5、e-3表達量顯著降低。另外在Oocyte-G1過表達轉基因小鼠中,Caspase-3的表達量也顯著增高。
　　 綜上所述,我們篩選并克隆了一個小鼠Kinesin超家族的新成員基因,Oocyte-G1,并對其功能進行了研究。上述結果均提示Oocyte-G1能通過作用于一些細胞凋亡因子而對凋亡過程具有一定促進作用,并進而影響了動物發(fā)育過程。深入研究Oocyte-G1在細胞凋亡以及生殖發(fā)育過程中的作用,能加深我們對哺乳動物生殖發(fā)育過程