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1、該文研究了米曲霉β-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的過程,包括酶的制備、酶的固定化、酶促合成及產(chǎn)物分離等,為低聚半乳糖的工業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ).對(duì)粗酶液進(jìn)行硫酸銨分級(jí)沉淀,結(jié)果表明去除雜蛋白的最佳硫酸銨飽和度為40％;沉淀酶蛋白的最佳硫酸銨飽和度為80％.β-半乳糖苷酶的最佳反應(yīng)溫度和最適pH分別為55℃和6.0,該酶具有較好的熱穩(wěn)定性,酶作用于底物乳糖的米氏常數(shù)Km和最大反應(yīng)速度Vmax分別為23.8mmol/L和23.9 μmol/(L.
2、min).通過對(duì)酶固定化方法的篩選,選用海藻酸鈣對(duì)酶進(jìn)行包埋并加以戊二醛交聯(lián),操作簡單,酶活力回收率高.用薄層色譜法檢測(cè)低聚半乳糖糖漿,結(jié)果表明以正丙醇:水=85:15為展開劑、苯胺-二苯胺-磷酸為顯色劑、0.2 μg/0.5 μ L的點(diǎn)樣量時(shí),分離效果較好.通過單因素試驗(yàn)和L<,16>(4<'5>)正交試驗(yàn),確定合成低聚半乳糖的最佳工藝條件:溫度55℃、pH6.0、乳糖濃度40％、加酶量40U/g(乳糖)、反應(yīng)時(shí)間32h,水解40％的
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