毛細(xì)管電泳中涂層技術(shù)及間接激光誘導(dǎo)熒光檢測的研究與應(yīng)用.pdf

1、高效毛細(xì)管電泳(high performance capillary electrophoresis，HPCE)是20世紀(jì)80年代初發(fā)展起來的新型分離分析技術(shù)，具有分離效率高、速度快、靈敏度高、所需樣品少、成本低、抗污染能力強等特點。毛細(xì)管電泳的理論和應(yīng)用研究是分析化學(xué)最活躍的領(lǐng)域之一，尤其對于大生物聚合物的分離測定，是一項強有力的分析技術(shù)，并廣泛應(yīng)用于人類基因組的測序當(dāng)中。但是，一個背受關(guān)注的問題是如何降低此類大生物聚合物在毛細(xì)管中的

2、吸附。涂層技術(shù)在毛細(xì)管電泳中的應(yīng)用，在降低蛋白質(zhì)吸附問題上獲得了較好的效果，從而被廣泛的使用。此外，激光誘導(dǎo)熒光檢測器具有很高的靈敏度，可以適應(yīng)毛細(xì)管電泳不同模式的檢測，已成為藥物分析和生命科學(xué)領(lǐng)域的一種重要的分析檢測技術(shù)。因此，本文用毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光檢測進(jìn)行研究并提出了分離分析的新體系。 該論文在綜述前人工作的基礎(chǔ)上，開展了如下未見文獻(xiàn)報道的創(chuàng)新性的研究工作： 1.以CDDS為涂層試劑，通過AFM顯微鏡考察了模

3、擬熔融硅石英板上的CDDS涂層，并通過對模型化合物-氨基酸的分析與測定，進(jìn)一步研究了CDDS涂層的性質(zhì)： 2.以CDDS為毛細(xì)管涂層試劑，建立了測定麻黃堿和偽麻黃堿的膠束電動色譜-激光誘導(dǎo)熒光(MEKC-LIF)快速靈敏分析新方法； 3.建立了同時測定人血清中表阿霉素、柔紅霉素和去甲氧基柔紅霉素的MEKC-LIF方法，并定量測定了癌癥病人血清中的表阿霉素和柔紅霉素； 4.使用熒光素鈉作為背景熒光試劑，建立了同時分

4、析測定苦參堿、槐定堿和槐果堿的毛細(xì)管區(qū)帶電泳-間接激光誘導(dǎo)熒光檢測新方法，擴大了激光誘導(dǎo)熒光檢測的應(yīng)用范圍，對難衍生化合物的分離分析提供了一種新思路和新途徑； 5.以熒光素鈉作為背景熒光試劑，建立了一種用于同時測定草豆蔻中山姜素和小豆蔻明含量的膠束電動色譜一間接激光誘導(dǎo)熒光檢測新方法. 論文共分為六章： 第一章：對毛細(xì)管電泳中涂層技術(shù)的研究進(jìn)展進(jìn)行了較為全面綜述，重點綜述了近年出現(xiàn)的永久涂層、半永久涂層和動態(tài)涂層

5、的發(fā)展趨勢和應(yīng)用。 第二章：以CDDS為涂層試劑，通過AFM顯微鏡和紅外光譜儀考察了模擬熔融硅石英板上的CDDS涂層，并通過對模型化合物-氨基酸的分析與測定，進(jìn)一步研究了CDDS涂層的穩(wěn)定性。在最優(yōu)的緩沖溶液條件下，5.5 min內(nèi)分離和測定了9種氨基酸，遷移時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別小于0.97％。 第三章：在第二章的基礎(chǔ)上，以CDDS為涂層試劑，建立了測定麻黃堿和偽麻黃堿的膠束電動色譜.激光誘導(dǎo)熒光(MEKC-LIF)快

6、速靈敏分析新方法。在最佳條件下，4 min內(nèi)可實現(xiàn)基線分離，靈敏度高，重現(xiàn)性好。 第四章：建立了同時測定人血清中表阿霉素、柔紅霉素和去甲氧基柔紅霉素的MEKC-LIF方法。該方法簡單，靈敏度高，可用于癌癥病人血清中的這三種抗生素的分析，得到的回收率范圍在95.7-100.2％。 第五章：建立了一種毛細(xì)管區(qū)帶電泳-間接激光誘導(dǎo)熒光檢測法同時測定苦參堿、槐定堿和槐果堿的毛細(xì)管區(qū)帶電泳-間接激光誘導(dǎo)熒光檢測新方法，擴大了LIF