毛細(xì)管電泳中衍生反應(yīng)的研究與應(yīng)用.pdf

1、由于兼具毛細(xì)管電泳(CE)超高分離效率和激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)(LIF)超高靈敏度的優(yōu)勢(shì)，CE-LIF聯(lián)用技術(shù)已經(jīng)成為測(cè)定多組分化合物的一種有力工具，在藥物及生命分析等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。但是，很多化合物本身并沒(méi)有熒光，即使有些化合物自身具有熒光，其激發(fā)波長(zhǎng)和所用激光光源波長(zhǎng)的不一致也會(huì)限制CE-LIF方法的應(yīng)用。為了克服這一缺點(diǎn)，分析工作者通常采用衍生反應(yīng)修飾分析物，使之轉(zhuǎn)變成具有適合光學(xué)性質(zhì)的衍生產(chǎn)物，從而達(dá)到檢測(cè)的目的。因此，衍生反應(yīng)

2、是CE-LIF方法的應(yīng)用基礎(chǔ)，目前已發(fā)展出包括柱前衍生、在柱衍生和柱后衍生等多樣化的衍生方法，可根據(jù)衍生的目的、被分析物和衍生試劑的物理化學(xué)性質(zhì)等靈活選擇，極大地?cái)U(kuò)展了CE-LIF方法的應(yīng)用范圍。然而，繁瑣耗時(shí)的樣品衍生也是限制CE-LIF方法中分析時(shí)間和樣品通量的瓶頸。 本論文在綜述前人工作的基礎(chǔ)上，重點(diǎn)聚焦于發(fā)展快速、自動(dòng)化的衍生反應(yīng)，主要進(jìn)行了以下幾個(gè)方面具有創(chuàng)新性的研究工作： 1.以NBD-Cl為衍生試劑，建立了

3、同時(shí)分離測(cè)定兒茶酚胺和氨基酸的膠束電動(dòng)色譜.激光誘導(dǎo)熒光(MEKC-LIF)靈敏分析新方法； 2. 以NBD-Cl為衍生試劑，兒茶酚胺為模型化合物，對(duì)比研究了水與非水體系中的衍生與分離行為，討論了膠束、微乳及非水體系對(duì)激光誘導(dǎo)熒光的增敏作用，并探討了非水體系衍生機(jī)理； 3、討論了NBD-F作為在柱衍生試劑的可行性，并發(fā)展了兩種基于自動(dòng)化在柱衍生的MEKCLIF方法，分別用于分離測(cè)定環(huán)境水體中的有機(jī)磷農(nóng)藥和藥物制劑中的麻黃

4、堿與偽麻黃堿； 4、以FITC為衍生試劑，探討了利用微波加熱縮短衍生反應(yīng)的可行性，并用于快速分離測(cè)定尿樣中三種組氨酸衍生物； 5.初步嘗試了藥物對(duì)映體和蛋白質(zhì)結(jié)合的比較研究，利用熒光光譜、紅外光譜、圓二色譜和分子對(duì)接模擬技術(shù)對(duì)比研究了抗葉酸藥物對(duì)映體與人血清白蛋白的相互作用，為評(píng)價(jià)手性藥物提供了一種新的思路。 論文共分七章： 第一章：對(duì)毛細(xì)管電泳中衍生反應(yīng)的研究進(jìn)展進(jìn)行了較為全面綜述，重點(diǎn)綜述了近年出現(xiàn)的

5、在線和在柱衍生的發(fā)展趨勢(shì)和應(yīng)用。 第二章：以NBD-Cl為衍生試劑，建立了一種同時(shí)分離測(cè)定兒茶酚胺和氨基酸的MEKC-LIF新方法，并詳細(xì)討論了兒茶酚胺和NBD-Cl反應(yīng)的機(jī)理，SDS膠束對(duì)兒茶酚胺衍生產(chǎn)物的增敏作用。在最優(yōu)條件下，兩種兒茶酚胺和11種氨基酸在13分鐘內(nèi)獲得分離，遷移時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別小于0.60％和6.50％。該方法成功應(yīng)用于測(cè)定植物藥、藥物制劑和人體尿樣中的兒茶酚胺和氨基酸，結(jié)果令人滿意。

6、 第三章：在第一章基礎(chǔ)上，以NBD-Cl為衍生試劑，兒茶酚胺為模型化合物，對(duì)比研究了水與非水體系中的衍生與分離行為。在單純的水體系中，兒茶酚胺衍生產(chǎn)物的熒光被完全猝滅，毛細(xì)管區(qū)帶電泳模式下無(wú)法獲得檢測(cè)信號(hào)；膠束和微乳液滴的加入可有效減少衍生產(chǎn)物的熒光猝滅效應(yīng)，增強(qiáng)熒光信號(hào)。與水體系中的衍生與分離相比，非水毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)(NACE-LIF)在增強(qiáng)靈敏度方面更具優(yōu)勢(shì)。在各自最優(yōu)的條件下，NACE-LIF方法中兒茶酚胺衍生產(chǎn)物的

7、熒光響應(yīng)較水體系毛細(xì)管電泳中增強(qiáng)了5-24倍。此外，本章對(duì)非水介質(zhì)中的衍生與分離機(jī)理進(jìn)行了詳細(xì)討論，這些討論對(duì)于拓展NACE-LIF方法的應(yīng)用具有實(shí)用價(jià)值。 第四章：探討了NBD-F作為在柱衍生試劑的可行性，建立了一種基于自動(dòng)化在柱衍生反應(yīng)的MEKC-LIF新方法，用于分離測(cè)定環(huán)境水體中的有機(jī)磷農(nóng)藥及其代謝物。詳細(xì)評(píng)價(jià)了不同的在柱衍生策略和進(jìn)樣順序，在最優(yōu)條件下，分析物和衍生試劑被順序(S-R)注入毛細(xì)管進(jìn)樣端，首先利用一個(gè)較低

8、電壓(5kV，30s)進(jìn)行混合，然后停留一段時(shí)間(7.5min)使之充分反應(yīng)，反應(yīng)完畢后直接加高電壓分離測(cè)定衍生產(chǎn)物。該方法簡(jiǎn)單、快速、自動(dòng)化程度較高，檢測(cè)限可達(dá)2.8-32.2 ng/mL。 第五章：在第四章基礎(chǔ)上，以NBD-F為衍生試劑，建立了一種基于自動(dòng)化在柱衍生分離測(cè)定麻黃堿和偽麻黃堿的MEKC-LIF新方法，系統(tǒng)考察了在柱衍生條件和MEKC分離條件。最優(yōu)條件下，麻黃堿和偽麻黃堿在10分鐘內(nèi)獲得分離，檢測(cè)限分別為4.8n

9、g/mL、1.6ng/mL。該方法成功應(yīng)用于分析植物麻黃及其藥物制劑中兩種生物堿的含量。 第六章：以FITC為衍生試劑，建立了一種基于微波輔助快速衍生的CE-LIF方法，用于測(cè)定人尿液樣品中的組氨酸、1-甲基組氨酸和3-甲基組氨酸。與傳統(tǒng)的水浴加熱方式(50℃，4 h)相比，微波加熱(700 W，2.5 min)極大地縮短了衍生反應(yīng)所需時(shí)間，該方法對(duì)于加快分析速度、提高分析通量極具潛力。 第七章：利用熒光光譜、紅外光譜、