基于GFP高靈敏熒光增強(qiáng)型Hg2+傳感研究.pdf

1、發(fā)展高選擇性、高靈敏度的Hg2+生物識(shí)別與傳感方法是頗為重要，也是一項(xiàng)富有挑戰(zhàn)的課題。如何對(duì)待Hg2+的熒光猝滅效應(yīng)以及避免Hg2+致蛋白變性，一直是開(kāi)發(fā)基于蛋白的Hg2+熒光增強(qiáng)型傳感分子的難題。
　　利用定點(diǎn)突變技術(shù)，對(duì)148 His進(jìn)行一次突變，得到源于大型多管水母的GFP突變體，實(shí)現(xiàn)對(duì)Hg2+高選擇性、高靈敏度的熒光增強(qiáng)型傳感。低濃度熒光滴定實(shí)驗(yàn)表明，該識(shí)別體系對(duì)Hg2+具有低至亞納摩爾級(jí)的檢測(cè)限。吸收光譜和CD光譜實(shí)驗(yàn)指

2、明了Hg2+引起蛋白熒光增強(qiáng)的機(jī)理，即GFP基態(tài)生色團(tuán)的陰離子狀態(tài)吸收增強(qiáng)。此外，我們用單分子FCS研究了Hg2+對(duì)突變體蛋白的影響，發(fā)現(xiàn)熒光增強(qiáng)過(guò)程中蛋白沒(méi)有形成聚集、分子間二硫鍵以及發(fā)生構(gòu)象變化，卻觀察到源于三線態(tài)的暗態(tài)增多過(guò)程，結(jié)合熒光增強(qiáng)時(shí)量子產(chǎn)率下降以及熒光壽命減少的數(shù)據(jù)，我們得以了解Hg2+對(duì)蛋白激發(fā)態(tài)的影響。進(jìn)一步突變研究使我們相信，在熒光增強(qiáng)過(guò)程中，Hg2+借助巰基的結(jié)合作用，穿過(guò)蛋白外表面的孔徑進(jìn)入內(nèi)部，影響生色團(tuán)基態(tài)