吖啶類化合物T19對H2O2誘發(fā)rBMECs上P-gp功能與表達(dá)變化的調(diào)節(jié).pdf

1、目的：探討吖啶類化合物T19對H2O2誘發(fā)大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（rat brain microvascular endothelial cells，rBMECs）上P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）功能與表達(dá)變化的調(diào)節(jié)及其作用機(jī)制研究。
　　方法：原代培養(yǎng) rBMECs和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞；用 MTT法檢測吖啶類化合物 T19對rBMECs增殖的影響；采用 Transwell技術(shù)建立共培養(yǎng)體系，通過測定外室熒光素鈉（f

2、luorescein sodium，NaF）的表觀滲透系數(shù)（apparent permeability coefficient，Papp）反映T19對血腦屏障緊密連接的影響；分別測定內(nèi)室、外室羅丹明123（Rhodamine123， Rh123）的Papp值以反映T19對rBMECs上P-gp功能的影響；通過共培養(yǎng)體系，在內(nèi)室加入100、150、200μM H2O2，測定外室NaF以及內(nèi)外室Rh123的Papp值以篩選建立氧化應(yīng)激模型的

3、條件；在共培養(yǎng)體系條件下，內(nèi)室加入H2O2和T19后測外室NaF以及內(nèi)外室Rh123的Papp值，反映T19對H2O2誘發(fā)rBMECs上P-gp功能變化的調(diào)節(jié)；通過流式細(xì)胞儀檢測 T19對 H2O2誘發(fā)后 ROS含量變化的影響；運(yùn)用免疫熒光法檢測T19對H2O2誘發(fā)后Nrf2的影響；通過在共培養(yǎng)體系內(nèi)室加入ERK抑制劑PD98059和NF-?B抑制劑PDTC測定外室NaF以及內(nèi)外室Rh123的Papp值，反映PD98059和PDTC對H

4、2O2誘發(fā)rBMECs上P-gp功能變化的調(diào)節(jié)；通過Western Blot法檢測正常培養(yǎng)條件下P-gp以及H2O2誘發(fā)后P-gp、P-ERK、P-I?B的蛋白表達(dá)，使用ERK抑制劑PD98059和NF-?B抑制劑PDTC以確定上下游關(guān)系。
　　結(jié)果：T19對 rBMECs增殖和緊密連接沒有影響；正常培養(yǎng)條件下，T19能抑制rBMECs上P-gp的功能和表達(dá)，并呈濃度依賴性；為了和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果保持一致，選擇150μM H2O2作用