以八羥基喹啉衍生物為配體的亞硝酰釕配合物的合成及其生物活性研究.pdf

1、NO在哺乳動(dòng)物中是至關(guān)重要的介質(zhì)之一，它在對(duì)細(xì)胞和器官功能的調(diào)控中充當(dāng)著重要的角色，NO在生物體系中的的重要性引起了科學(xué)家對(duì)體內(nèi)釋放NO試劑的關(guān)注，這些試劑可能是在熱或光的激發(fā)下釋放NO的，隨后NO被運(yùn)送到目標(biāo)細(xì)胞或器官。結(jié)合NO的金屬配合物不僅在配位化學(xué)而且在生物化學(xué)和藥理學(xué)等領(lǐng)域的重要應(yīng)用也受到了廣泛的關(guān)注。NO能結(jié)合多種類型的中心金屬離子，從而形成具有不同結(jié)構(gòu)、配位數(shù)和電子性質(zhì)的的亞硝酰配合物。基于這些發(fā)現(xiàn)，許多過(guò)渡金屬的亞硝酰配

2、合物作為潛在的NO載體而被廣泛的研究，它們能在光照射時(shí)在生物組織中釋放并傳遞NO。亞硝酰釕配合物被認(rèn)為是潛在的NO轉(zhuǎn)運(yùn)試劑，這是由于它們的熱穩(wěn)定性能以及在光刺激條件下能釋放NO的特殊性質(zhì)。目前，尋找有效的外源性NO供體、定向地將NO供體運(yùn)輸?shù)讲∽儾课灰约癗O在特定部位的定時(shí)定量釋放是目前科學(xué)研究的熱點(diǎn)。
　　本文中，合成了[(CH3)4N][RuCl3(2mqn)(NO)]、[(CH3)4N][RuCl3(2cqn)(NO)]、[

3、(CH3)4N][RuCl3(qn)(NO)]三種配合物,配體分別是H2mqn、H2cqn以及qn；并用1H NMR技術(shù)、IR技術(shù)以及UV光譜對(duì)其進(jìn)行表征，比較了它們的理化性質(zhì)；利用NO選擇性電極法測(cè)定了光激發(fā)條件下配合物釋放NO的量，初步獲得了光調(diào)控配合物釋放NO的方法；研究了DNA-EB熒光光譜在加入三種亞硝酰釕配合物后的變化情況，并采用靜態(tài)淬滅法簡(jiǎn)單分析了它們之間結(jié)合的機(jī)制、結(jié)合常數(shù)以及結(jié)合位點(diǎn)數(shù)，通過(guò)比較結(jié)合常數(shù)的大小確定了三種

4、配合物與 DNA的結(jié)合強(qiáng)弱順序是：[RuCl3(2cqn)(NO)]->[RuCl3(2mqn)(NO)]->[RuCl3(qn)(NO)]-；利用瓊脂糖凝膠電泳法研究了光照條件下DNA的電泳條帶在加入三種亞硝酰釕配合物后的變化；通過(guò)研究HSA的熒光光譜、紫外光譜以及同步熒光光譜在加入三種配合物后的變化情況來(lái)判斷它們之間相互結(jié)合的方式；探究三種配合物對(duì)腫瘤細(xì)胞活性的影響。
　　本文主要研究?jī)?nèi)容主要包括六個(gè)部分：
　　第一：主

5、要介紹了NO的生理功能以及常見(jiàn)的外源性NO供體，光動(dòng)力療法的研究進(jìn)展。
　　第二：在Ru(NO)Cl3(H2O)2配合物的基礎(chǔ)上，分別合成了以H2mqn、H2cqn和qn為配體的三種亞硝酰釕配合物[(CH3)4N][RuCl3(2mqn)(NO)]、[(CH3)4N][RuCl3(2cqn)(NO)]、[(CH3)4N][RuCl3(qn)(NO)]，并用紅外光譜檢測(cè)了配合物的特征官能團(tuán)的振動(dòng)峰位置；利用1H NMR技術(shù)測(cè)定了每種

6、亞硝酰釕配合物中包含的各類氫原子的化學(xué)位移值以及個(gè)數(shù)；測(cè)定了三種亞硝酰釕配合物的紫外吸收光譜圖，確定了各特征吸收峰的位置，并對(duì)每一個(gè)吸收峰進(jìn)行歸屬。
　　第三：使用TBR-4100自由基分析儀首先檢測(cè)了不光照條件下，三種亞硝酰釕配合物在溶液中釋放NO的情況，接著使用光源照射樣品，實(shí)時(shí)定量的檢測(cè)溶液中的電流信號(hào)值，結(jié)果表明配合物釋放NO的量隨光照時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加。
　　第四：通過(guò)觀察DNA-EB熒光光譜在加入配合物后的變化

7、情況來(lái)確定它們之間的結(jié)合方式，接著采用靜態(tài)淬滅法分析并計(jì)算它們之間結(jié)合常數(shù)的大小，最終得出三種配合物與DNA結(jié)合的強(qiáng)弱順序是：RuCl3(2cqn)(NO)]->[RuCl3(2mqn)(NO)]->[RuCl3(qn)(NO)]-。通過(guò)研究不光照和光照條件下，三種亞硝酰釕配合物的加入對(duì)質(zhì)粒pBR322 DNA的電泳條帶的影響來(lái)確定配合物對(duì)DNA的光剪切作用，采用的方法是瓊脂糖凝膠電泳法，結(jié)果表明在黑暗條件下配合物對(duì)DNA幾乎沒(méi)有表現(xiàn)出

8、剪切活性，DNA都以超螺旋形式存在，而在光照條件下配合物卻表現(xiàn)出很好的光剪切作用。
　　第五：通過(guò)觀察HSA的熒光光譜在加入三種亞硝酰釕配合物之后的淬滅情況，確定了配合物與HSA之間發(fā)生了結(jié)合作用，并采用靜態(tài)淬滅法進(jìn)行分析，最后通過(guò)比較結(jié)合常數(shù)的大小判斷了三種配合物與 HSA結(jié)合的強(qiáng)弱順序?yàn)椋篬RuCl3(2cqn)(NO)]->[RuCl3(2mqn)(NO)]->[RuCl3(qn)(NO)]-；利用紫外光譜法對(duì)上述結(jié)論進(jìn)一步

9、檢驗(yàn)；通過(guò)研究HSA的同步熒光光譜在加入配合物之后的淬滅情況來(lái)判斷它們之間的作用機(jī)理，結(jié)果表明金屬釕配合物會(huì)影響HSA中的酪氨酸和色氨酸殘基的疏水環(huán)境并引起HSA構(gòu)象的變化。
　　第六：利用MTT法探究了不光照和光照條件下，三種亞硝酰釕配合物對(duì)腫瘤細(xì)胞MCF-7和HepG-2活性的抑制作用，通過(guò)計(jì)算IC50值，確定了各配合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性大小為：[RuCl3(2cqn)(NO)]->[RuCl3(2mqn)(NO)]->[RuC