基于糖鏈轉(zhuǎn)移酶的N-糖鏈相對(duì)定量分析研究.pdf

1、糖基化是一種在許多生命活動(dòng)中都占據(jù)重要地位的化學(xué)反應(yīng)過程，例如細(xì)胞的黏附、宿主-病原體的相互作用、蛋白質(zhì)合成的控制以及許多細(xì)胞因子在生物體內(nèi)生物活性的保留。研究證明，人類的許多病癥如癌癥、代謝性疾病、神經(jīng)退行性疾病等，都與蛋白質(zhì)表面糖鏈的結(jié)構(gòu)與表達(dá)量息息相關(guān)。因此，對(duì)人體內(nèi)糖鏈表達(dá)量的監(jiān)控對(duì)于疾病的控制以及發(fā)生發(fā)展情況的掌握都具有重大意義。利用Endo-M酶的轉(zhuǎn)糖基特性，結(jié)合基于質(zhì)譜檢測(cè)的穩(wěn)定同位素標(biāo)記方法，能夠在不對(duì)標(biāo)記效果和樣品純化

2、造成不良影響的前提下，完成對(duì)N-糖鏈的相對(duì)定量過程。
　　本研究分為三個(gè)部分：第一章對(duì)糖鏈的種類以及生物功能做了介紹，并簡(jiǎn)單總結(jié)了糖鏈的提取分離和分析方法。第二章在已發(fā)表文獻(xiàn)所描述的合成方法的基礎(chǔ)上，改進(jìn)了受體d0/d8-PEPZ-Boc-Asn-GlcNAc最后一步的合成方法，利用DMT-MM配合甲醇體系代替TPP-DPDS作為反應(yīng)催化劑，使反應(yīng)產(chǎn)率由原先的40％左右提高到80%以上。同時(shí)將d0/d8-MPEPZ-Boc-Asn

3、-GlcNAc合成過程中的反應(yīng)溶劑由純甲醇替換為乙腈-DMF，使得反應(yīng)能夠一次進(jìn)行完全。并對(duì)所得產(chǎn)物進(jìn)行了核磁、紅外、紫外、質(zhì)譜、液相等表征。第三章通過LC-ESI-MS進(jìn)行分析，比較了本實(shí)驗(yàn)室所合成的四種輕標(biāo)記受體PEPZ-Boc-Asn-GlcNAc、PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc、MPEPZ-Boc-Asn-GlcNAc、MPDPZ-Boc-Asn-GlcNAc在Endo-M-N175Q作用下與SGP的反應(yīng)性后，確定了受體