光分析法在測定肝素、輔酶A及血清葡萄糖中的應用.pdf

1、肝素是某些哺乳動物體內(nèi)制造的一種糖類聚合物.在人體內(nèi)由肥大細胞分泌而自然存在于血液中.因其在體內(nèi)外均有延緩或阻止血液凝固的作用,早在1 935年臨床上就用它來預防和治療各種血栓類疾病.由于其吸收性好、抗血栓作用強、體內(nèi)半衰期長、生物利用度高,目前仍是心血管和血栓病人的首選抗凝血藥.除此之外,肝素或其衍生物還具有調(diào)血脂、抗血栓、改善血液流變學指標、抗炎、抗過敏及免疫調(diào)節(jié)等作用,是臨床上重要的生化藥物之一. 輔酶A是含泛酸的復合核苷酸

2、,在細胞內(nèi)由泛酸,半胱氨酸和ATP合成.對糖、蛋白質(zhì)及脂肪的代謝起著重要作用,并與三羧酸循環(huán)、肝糖原的貯存、乙酰膽堿的合成、膽固醇量及血漿脂肪含量的調(diào)節(jié)等均有密切關系.作為各種疾病的重要輔助用藥,輔酶A可有效的改善抑郁、焦慮、易怒、食欲減退、疲勞、經(jīng)常性呼吸道感染、麻木、肌肉無力、痙攣、感覺異常(如刺痛感、麻刺感、雙腳燒灼感)、腎上腺衰竭等癥狀.因此建立一種準確、靈敏的測定CoA的方法無論在臨床上,還是在藥學上,都具有很重要的意義.

3、 辣根過氧化物酶是一種植物過氧化物酶.可以催化過氧化氫氧化底物,根據(jù)底物結構的變化從而測定過氧化氫或辣根過氧化物酶.許多生物樣品在相應酶的催化下分解也會產(chǎn)生過氧化氫,如血清中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下可以產(chǎn)生過氧化氫.將葡萄糖氧化酶與辣根過氧化物酶聯(lián)用,可以檢測臨床上的重要指標血清中葡萄糖的含量.本文主要以以上三個方向為目標,以分子光譜(熒光、紫外)作為研究手段,運用熒光光度法建立了分析肝素及輔酶A的靈敏、簡便的測定方法.運用紫外

4、一可見分光光度法研究了辣根過氧化物酶催化下,過氧化氫氧化偶氮類物質(zhì)的作用機理,并與葡萄糖氧化酶聯(lián)用,測定了血清中的葡萄糖含量,共分為三章. 第一章,研究了肝素對四環(huán)素類藥物一銪配合物的熒光增強作用并分析測定了針劑中的肝素.四環(huán)素藥物具有β一二酮結構,是銪的理想配體,所生成的二元配合物發(fā)射出銪離子位于612nm的特征熒光.在最佳實驗條件下,肝素能使四環(huán)素類藥物-銪位于612nm處的特征熒光顯著增強且增強的熒光強度與肝素的含量成正比.

5、研究了測定肝素的最佳的實驗條件并成功地應用于實際樣品的測定.利用熒光光譜及Forster非輻射能量轉移理論研究了Eu<'3+>、肝素及強力霉素或土霉素之間的相互作用機理,并利用Rosethanl建立的一種用繪圖法計算生物大分子與配合物之間的結合常數(shù)(K)和結合位點數(shù)(N)的方法計算了肝素與強力霉素-Eu<'3+>或土霉素-Eu<'3+>配合物之間的結合常數(shù)(K)和結合位點數(shù)(N). 第二章,研究了高碘酸存在下藥物一稀土離子配合物與

6、輔酶A的相互作用并應用于輔酶A針劑的測定及生物樣品中輔酶A及其衍生物總量的測定.在高碘酸存在下藥物與稀土離子存在能量轉移,而加入輔酶A可以使體系的熒光強度顯著增強.在最佳實驗條件下,輔酶A在一定濃度范圍內(nèi)的加入量與稀土離子的特征熒光強度成正比,根據(jù)這一性質(zhì),建立了一種以環(huán)丙沙星一鋱配合物或強力霉素一銪配合物作為熒光探針測定輔酶A的方法,并成功用于輔酶A針劑及豬肝中輔酶A及其衍生物總量的測定. 第三章,研究了辣根過氧化物酶催化過氧化