滾環(huán)擴(kuò)增陽(yáng)離子共軛聚合物均相檢測(cè)microRNA.pdf

1、microRNA（miRNA）是一種長(zhǎng)度一般在20-24個(gè)核苷酸左右的非編碼小分子RNA，它在基因調(diào)控和表達(dá)中起著重要作用。由于它在生物個(gè)體發(fā)育分化等生命活動(dòng)中有著重要調(diào)節(jié)作用，因此對(duì)miRNA的檢測(cè)在研究生物功能和臨床診斷等方面具有重要意義。本論文應(yīng)用滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)結(jié)合陽(yáng)離子共軛聚合物均相檢測(cè)，提出了一種在均相溶液中進(jìn)行microRNA檢測(cè)的新方法。設(shè)計(jì)的鎖式探針（PLP）與目標(biāo)分子miRNA-221兩側(cè)序列完全互補(bǔ)，然后在T4RNA連

2、接酶2的作用下，PLP探針首尾相接被連接成環(huán)。隨后目標(biāo)分子miRNA-221可直接作為引物，以環(huán)形PLP探針為模板在Phi29DNA聚合酶作用下引發(fā)滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)，生成上萬(wàn)個(gè)堿基的DNA單鏈產(chǎn)物。隨后在擴(kuò)增產(chǎn)物中加入與其互補(bǔ)的熒光標(biāo)記探針，并使其充分雜交。未雜交的熒光標(biāo)記探針應(yīng)用核酸外切酶I降解為單核苷酸分子。當(dāng)加入陽(yáng)離子共軛聚合物時(shí)，由于陽(yáng)離子共軛聚合物和DNA鏈之間很強(qiáng)的靜電吸引作用，在二者之間會(huì)產(chǎn)生高效率的熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET