香菇柄多肽的制備及其抗氧化活性研究.pdf

1、香菇是一種藥食兩用的真菌，不僅肉質(zhì)脆嫩，味道鮮美，而且具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值。香菇柄是香菇產(chǎn)品加工過(guò)程中的副產(chǎn)品，約占香菇干重的20％-30％，由于菇柄呈纖維化，粗韌難嚼，絕大部分都被廢棄，少量用作飼料，全國(guó)每年廢棄的香菇柄有數(shù)萬(wàn)噸，造成了資源的極大浪費(fèi)。實(shí)際上香菇柄和菇蓋中同樣含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、礦物元素等營(yíng)養(yǎng)成分，因此香菇柄具有一定的開發(fā)利用價(jià)值。
　　研究了不同提取方法對(duì)香菇柄蛋白提取率的影響，堿提法、纖

2、維素酶法和超聲輔助法的香菇柄蛋白提取率分別為13.45％、18.57％和22.44％,即超聲輔助法為最佳提取方法。超聲輔助提取香菇柄蛋白的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蛋白提取率隨著料液比、pH值、超聲功率和超聲時(shí)間的增大均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各因素對(duì)香菇柄蛋白提取率的影響大小依次為:pH值＞料液比＞超聲時(shí)間＞超聲功率。超聲輔助提取香菇柄蛋白的最佳工藝組合為:料液比1∶35，pH12，超聲功率400W，超聲時(shí)間20 min，

3、在此條件下香菇柄蛋白的提取率為25.97％。方差分析結(jié)果表明，pH值對(duì)香菇柄蛋白提取率有顯著影響(P＜0.05)，而料液比、超聲時(shí)間和功率對(duì)蛋白提取率的影響不顯著。
　　比較了堿提法、纖維素酶法和超聲輔助法提取得到的香菇柄蛋白的功能特性。超聲法提取的香菇柄蛋白溶解性、乳化穩(wěn)定性、起泡性和泡沫穩(wěn)定性較高，分別為81.92％、86.56％、263.16％、65.00％;而纖維素酶法提取的香菇柄蛋白吸油性和乳化活性偏高，分別為6.60m

4、L/g和1.54％。相比之下，傳統(tǒng)堿提法所得的香菇柄蛋白除了持水性較高之外，其他的功能特性均比超聲輔助法或纖維素酶法提取的蛋白低一些。
　　研究了木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶以及復(fù)合蛋白酶對(duì)香菇柄蛋白酶解液水解度和DPPH·清除率的影響，確定堿性蛋白酶為最佳酶源。酶解單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著底物濃度的不斷增加，香菇柄酶解液的水解度呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，而DPPH·自由基清除率則先增大后減小，在底物濃度為3％時(shí)達(dá)到最高

5、。隨著加酶量的增加，香菇柄酶解液的水解度先增大后保持穩(wěn)定，在加酶量為5000U/g時(shí)，DPPH·自由基清除率達(dá)到最大值36.10％，隨后呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。香菇柄酶解液的水解度和DPPH·自由基清除率隨溫度的升高均呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)，在55℃時(shí)，水解度和DPPH·自由基清除率均達(dá)到最大。隨著pH的增大，水解度和DPPH·自由基清除率都是先增大后減小，pH為8.5時(shí)，水解度最大，而pH為9時(shí)，DPPH·自由基清除率最高。水解度隨著時(shí)間的增

6、加而逐漸增大，在3h時(shí)達(dá)到最大值36.80％，隨后保持不變，而DPPH·自由基清除率隨時(shí)間的延長(zhǎng)則呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)。
　　以底物濃度、加酶量、pH和酶解溫度為影響因素，以DPPH·清除率為響應(yīng)值，進(jìn)行四因素三水平的響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，制備香菇柄多肽的最優(yōu)參數(shù)為:底物濃度2％、加酶量4700 U/g、pH為8.3、酶解溫度為55℃。在此條件下，酶解時(shí)間為2.5 h時(shí)制備香菇柄抗氧化肽，DPPH·自由基清除率理論值可達(dá)到63.

7、20％。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下做驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，得到DPPH·清除率的實(shí)際值為62.02％，與理論值相差不大。
　　利用超濾法分離純化香菇柄多肽，得到LP1(＞10 kDa)、LP2(3 kDa～10 kDa)、LP3(＜3 kDa)三個(gè)組分，抗氧化活性測(cè)定結(jié)果表明，組分LP3的抗氧化能力最高，其·OH和O2-·清除率以及還原力的吸光值分別為57.33％、51.74％和1.1224。組分LP3再經(jīng)凝膠層析分離得到四個(gè)組分LP3-1、LP3-

8、2、LP3-3以及LP3-4，收集不同組分測(cè)定抗氧化能力。結(jié)果表明，組分LP3-1和LP3-2的自由基清除率以及還原力均較低，而組分LP3-3和LP3-4的抗氧化能力均偏高。組分LP3-3的·OH和O2-·自由基清除率以及還原力分別為50.75％、68.75％、1.1913;而組分LP3-4的·OH和O2-·自由基清除率和還原力分別為60.44％、57.73％、1.1630。
　　根據(jù)凝膠層析標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程以及各組分的保留時(shí)間，