常壓電離質(zhì)譜法在生物分子分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、質(zhì)譜分析是分析化學(xué)的一個(gè)重要分支領(lǐng)域，具有響應(yīng)速度快、靈敏度高、樣品消耗量少和可提供樣品分子的結(jié)構(gòu)信息。近幾年，為了定性和定量復(fù)雜的生物分子，相繼涌現(xiàn)出了具有實(shí)時(shí)在線(xiàn)、非破壞、低損耗、快速分析等一系列常壓電離技術(shù)質(zhì)譜學(xué)方法?；诔弘婋x技術(shù)，本論文建立了生物分子的快速定性和定量分析的方法。主要內(nèi)容包括：
　　1、簡(jiǎn)述了生物分子的研究?jī)r(jià)值以及各種檢測(cè)生物分子方法的原理、優(yōu)缺點(diǎn)，綜述了電噴霧電離技術(shù)（ESI-MS）和電噴霧萃取電離技術(shù)

2、（EESI-MS）的原理及在生物分子分析檢測(cè)中的應(yīng)用研究。
　　2、ESI-MS技術(shù)對(duì)DNA寡核苷酸和蛋白質(zhì)生物聚合物進(jìn)行快速、直接分析。利用少量（＜1%）增壓試劑（環(huán)丁砜、間-硝基芐醇 m-NBA）及熱活化，分別在正、負(fù)離子模式下，即軟增壓提高不同生物聚合物的電荷價(jià)態(tài)，降低m/z值，減少生物信息量損失。通過(guò)對(duì)比兩種增壓模式及增壓程度，獲得生物聚合物的質(zhì)譜圖，結(jié)果表明增壓試劑顯著地影響生物大分子ESI過(guò)程中電荷價(jià)態(tài)，獲得了較寬的價(jià)

3、態(tài)分布，并較好的保留大分子的結(jié)構(gòu)。當(dāng)兩種增壓誘導(dǎo)同時(shí)進(jìn)行時(shí)，增壓的凈效應(yīng)等同于熱活化誘導(dǎo)。電荷價(jià)態(tài)增高的離子與增壓試劑直接存在氣相離子誘導(dǎo)。進(jìn)一步理解了增壓誘導(dǎo)的物理機(jī)制，揭示了生物大分子構(gòu)象變化與增壓行為的關(guān)系。
　　3、采用研制用于生物樣品研究的EESI電離源和質(zhì)譜（MS）儀之間的接口，建立 EESI-MS技術(shù)對(duì)尿液、血漿中多種氨基酸進(jìn)行快速、直接分析的研究平臺(tái)，選擇極性不同的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)樣品來(lái)優(yōu)化和表征 EESI-MS研究平臺(tái)

4、。采用同位素內(nèi)標(biāo)直接加入原始樣品，考察EES-MS檢測(cè)氨基酸的線(xiàn)性范圍和穩(wěn)定性；采用EESI分析檢測(cè)了肺癌患者和健康人的血漿，分析氨基酸在不同人群中血漿的含量變化，并結(jié)合主成分分析（PCA）區(qū)分。結(jié)果表明，生物流體中的多個(gè)氨基酸可以在1分鐘之內(nèi)直接定量測(cè)定，而且肺癌患者的EESI-MS指紋圖譜與正常人的具有顯著區(qū)分。此方法將在代謝組學(xué)、臨床分析、藥代動(dòng)力學(xué)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。
　　4、總結(jié)本論文建立的分析方法及其應(yīng)用研究，提