赭曲霉毒素A的熒光生物傳感檢測(cè)新方法研究.pdf

1、真菌毒素引起的食品安全問(wèn)題已成為世界各國(guó)關(guān)注的焦點(diǎn)，目前已報(bào)道的檢測(cè)方法有很多種但各自都有其優(yōu)缺點(diǎn)，因此，發(fā)展一種高選擇性、高靈敏度的檢測(cè)方法具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。隨著科技的發(fā)展，納米材料由于其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)及特性在眾多的領(lǐng)域研究中受到越來(lái)越多的青睞。其在生命科學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用已經(jīng)成為該領(lǐng)域研究的主流。納米材料與生物傳感器相結(jié)合，主要包括生命醫(yī)藥、化學(xué)化工、納米生物學(xué)等多個(gè)學(xué)科，具有很高的研究?jī)r(jià)值。本論文以核酸適配體的特異性識(shí)別能力為基礎(chǔ)

2、，將納米技術(shù)與生物傳感技術(shù)結(jié)合，利用納米材料在光學(xué)、化學(xué)及生物學(xué)方面表現(xiàn)出的特殊性質(zhì)，以一種真菌毒素-赭曲霉毒素A為研究對(duì)象，建立了三種測(cè)定赭曲霉毒素A的新方法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)赭曲霉毒素A的高靈敏、高選擇、高效率的識(shí)別與檢測(cè)。
　　全文分為以下三部分：
　　一、基于量子點(diǎn)熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測(cè)赭曲霉毒素A
　　基于量子點(diǎn)與熒光猝滅基團(tuán)之間構(gòu)成的熒光共振能量轉(zhuǎn)移體系，以量子點(diǎn)標(biāo)記赭曲霉毒素 A適配體與熒光猝滅基團(tuán)標(biāo)記的補(bǔ)體雜交構(gòu)

3、成熒光傳感探針，當(dāng)有赭曲霉毒素A存在時(shí)，由于其適配體與赭曲霉毒素A的高度親和作用，使傳感探針上結(jié)合的熒光猝滅劑減少，熒光增強(qiáng)，從而建立了一種檢測(cè)赭曲霉毒素A的熒光分析方法。這種檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、快速、特異性強(qiáng)，在最優(yōu)的條件下，該方法在0.2μmol/L~1.6μmol/L內(nèi)有良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為：ΔF=92.2c+95.06，線性相關(guān)系數(shù)R=0.9955，方法的檢出限為0.16μmol/L。
　　二、基于納米金猝滅熒光的適配

4、體傳感技術(shù)檢測(cè)赭曲霉毒素A
　　基于分散和聚沉狀態(tài)下的納米金的熒光猝滅效應(yīng)的差異以及核酸適配體的特異性識(shí)別能力為基礎(chǔ)，一種簡(jiǎn)單、快速、低成本的適配體傳感技術(shù)檢測(cè)赭曲霉毒素 A。當(dāng)赭曲霉毒素 A存在時(shí)，可以與其適配體特異性結(jié)合，導(dǎo)致適配體構(gòu)象發(fā)生改變，適配體脫離納米金表面，納米金抗鹽能力減弱，熒光增強(qiáng)，從而建立了一種檢測(cè)赭曲霉毒素 A的熒光分析方法。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)鹽濃度、反應(yīng)時(shí)間等條件進(jìn)行了優(yōu)化。在最優(yōu)的條件下，該方法在25 nmol

5、/L~300 nmol/L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為：ΔF=0.293c+4.263，線性相關(guān)系數(shù)R=0.9957，方法的檢出限為22.7 nmol/L。
　　三、基于抗體包被的熒光免疫分析新模式測(cè)定赭曲霉毒素A
　　基于二抗與半抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合固相抗體的免疫分析新模式，建立了測(cè)定赭曲霉毒素A的新型免疫熒光分析方法。本實(shí)驗(yàn)采用競(jìng)爭(zhēng)型的免疫反應(yīng)模式，IgG-FITC與半抗原OTA競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合固相抗體，隨著半抗原OTA濃度的