酶切保護(hù)PCR分析檢測(cè)環(huán)境中二惡英類化合物的方法學(xué)研究.pdf

1、二惡英類化合物(DLCs)是包括二氯苯并二惡英(PCDDs)、二氯苯并呋喃(PCDFs)和多氯聯(lián)苯(PCBs)等一大類化合物的總稱,由于其在環(huán)境中分布廣泛,不易于生物及化學(xué)降解,毒性高以及生物富集和生物放大的特性,對(duì)人和動(dòng)物造成嚴(yán)重的影響.化學(xué)抽提結(jié)合高效氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)機(jī)檢測(cè)(HRGC/HRMS)被認(rèn)為是鑒定和定量單個(gè)PCDD、PCB和PCDF異構(gòu)體的"金標(biāo)準(zhǔn)"方法.該方法檢測(cè)費(fèi)用昂貴,費(fèi)時(shí),故而發(fā)展了大量快速、經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)和估計(jì)DLC

2、s復(fù)合混合物的相對(duì)作用強(qiáng)度的篩選生物實(shí)驗(yàn).目前兩種方法已經(jīng)被美國(guó)EPA推薦為指導(dǎo)方法:熒光報(bào)道基因生物法和免疫法.該研究建立了一種新DLCs檢測(cè)生物技術(shù),稱為酶切保護(hù)PCR分析(EPM-PCR),比這兩種推薦生物方法更為靈敏和簡(jiǎn)便,更適于廣泛推廣.EPM-PCR分析原理基于DLCs的作用機(jī)制,利用了一種介導(dǎo)DLCs效應(yīng)的配體依賴因子——多環(huán)芳烴受體(AhR).DLCs通過在體外激活細(xì)胞溶質(zhì)中的AhR,形成的配體:AhR復(fù)合物進(jìn)入胞核與核

3、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Arnt結(jié)合成雜二聚體復(fù)合物,能識(shí)別相關(guān)基因(如CYPlAl)上游基因增強(qiáng)子部位一段特異DNA序列,即二惡英反應(yīng)元件(DREs),增強(qiáng)靶基因的轉(zhuǎn)錄及其相關(guān)酶產(chǎn)物的生成.EPM-PCR分析通過定性與定量檢測(cè)DLCs活化AhR結(jié)合DNA的量來估算二惡英的作用劑量.已經(jīng)證實(shí)二惡英誘導(dǎo)產(chǎn)生的結(jié)合DNA與其毒效應(yīng)在一定范圍內(nèi)呈比例,所以該方法可以評(píng)價(jià)樣本的綜合毒性當(dāng)量(TEQs).創(chuàng)新之處:該項(xiàng)研究受到國(guó)家自然科學(xué)基金資助(No.2010