場強(qiáng)化輔助多相體系萃取分離鬼箭羽中有效成分的研究.pdf

1、鬼箭羽（Euonymus alatus）（又稱為衛(wèi)矛）隸屬于衛(wèi)矛科衛(wèi)矛屬植物衛(wèi)矛，作為傳統(tǒng)中藥在中國已應(yīng)用了兩千多年。根據(jù)現(xiàn)代藥理的相關(guān)研究表明，鬼箭羽具有降血糖、降血壓和抗腫瘤等活性。鬼箭羽中主要含有黃酮和酚酸等有效成分，對于此類活性成分以前多采用加熱回流萃取、冷浸萃取等方法進(jìn)行萃取，但這些傳統(tǒng)的萃取分離方式需要使用較多的有機(jī)溶劑，而且萃取效率低。本文系統(tǒng)地研究了在不同溫度下不同分子量的聚乙二醇（PEG）對雙水相組成的影響及其相變化規(guī)

2、律，繪制相圖、擬合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)并對相平衡數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)。利用體系濁點(diǎn)和分相特征，基于有效成分的化學(xué)性質(zhì)，結(jié)合外加超聲和微波場的強(qiáng)化輔助作用，分別在均勻和分相狀態(tài)下萃取鬼箭羽中有效成分，旨在建立簡單、快速、高效的樣品前處理方法，采用光譜和色譜分析方法對其進(jìn)行定量分析，研究的主要內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　1、采用UPLC-QTOF-MS對鬼箭羽萃取液中的黃酮和酚酸類化合物進(jìn)行分析鑒定，通過其一級、二級質(zhì)譜和紫外光譜的分析，并對其裂解途徑進(jìn)行推斷

3、，最后通過與對照品進(jìn)行驗(yàn)證，已確定萃取液中含有兒茶素、二氫楊梅素兩種黃酮化合物和兩種酚酸類化合物即沒食子酸和鞣花酸，它們是鬼箭羽中主要有效化學(xué)成分。
　　2、采用反相液相色譜法和紫外分光光度法，建立了鬼箭羽中黃酮和酚酸類成分兒茶素、二氫楊梅素、沒食子酸和鞣花酸的HPLC和UV分析方法。以乙腈-0.5％磷酸為流動(dòng)相，在280nm處進(jìn)行檢測，其分離度良好，兒茶素和二氫楊梅素的保留時(shí)間分別為19.09min和26.64min，分別在0.

4、8992-56.20mg·L-1和1.004-50.20mg·L-1范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其回收率在99.5-101.5%之間，其RSD分別為1.17%和1.24%；而沒食子酸和鞣花酸保留時(shí)間為6.21min和32.79min，分別在0.9200-46.00mg·L-1和0.8580-42.90mg·L-1范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其回收率在99.0-101.2%之間，其RSD分別為0.79%和0.96%。以蘆丁作為對照品，采用鹽酸

5、-鎂粉法建立鬼箭羽總黃酮含量的測定。鬼箭羽中總黃酮在0.1024-1.024mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回收率在99.76-101.4%之間，其RSD值為0.98%。對于鬼箭羽中總酚酸的含量測定采用不顯色直接測定法，以沒食子酸作為對照品，在281nm處對總酚酸進(jìn)行檢測，建立了總酚酸的紫外測定方法。鬼箭羽中總酚酸在0.92-18.4mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回收率在99.50-100.7%之間，其RSD值為0.50%

6、，將此方法用于鬼箭羽中黃酮和酚酸類化合物的測定，方法可靠。
　　3、對PEG-(NH4)2SO4雙水相相平衡的性質(zhì)及其相關(guān)數(shù)據(jù)的測定。用濁點(diǎn)法測定了PEG-(NH4)2SO4雙水相體系的相圖，考察了PEG分子量和溫度對相平衡的影響情況，采用Merc huk經(jīng)驗(yàn)方程對其雙節(jié)線數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合；而其相平衡數(shù)據(jù)的關(guān)聯(lián)則用經(jīng)驗(yàn)方程Othmer-Tobias和Bancrof經(jīng)驗(yàn)方程。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PEG成相能力隨著其分子量的變化順序分別為：PE

7、G-6000＞PEG-4000＞PEG-2000＞PEG-1000＞PEG-400。PEG-(NH4)2SO4雙水相體系兩相區(qū)隨著溫度的升高其成相能力增強(qiáng)，即雙節(jié)線更靠近原點(diǎn)。各個(gè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)擬合的相關(guān)系數(shù)都大于0.99，說明方程關(guān)聯(lián)效果良好，為后續(xù)的試驗(yàn)提供了理論基礎(chǔ)。
　　4、采用超聲輔助回流萃取技術(shù)，通過不同分子量PEG篩選，以PEG-400水溶液作為萃取溶劑，利用單因素試驗(yàn)結(jié)合響應(yīng)面分析研究了鬼箭羽中黃酮化合物的萃取條件，并通

8、過溫度誘導(dǎo)濁點(diǎn)分相萃取，進(jìn)一步研究了目標(biāo)萃取物萃取富集分離效果。超聲輔助萃取的優(yōu)化條件為：PEG-400濃度15%（w/w），藥材顆粒度80目，液料比60:1，萃取時(shí)間10min。經(jīng)驗(yàn)證在優(yōu)化條件下總黃酮、兒茶素和二氫楊梅素平均收率分別為3.126、0.657和1.353mg/g。在所得到的萃取液中通過加入5.6g(NH4)2SO4，控制平衡溫度為75℃，pH為3.5可誘導(dǎo)濁點(diǎn)分相萃取黃酮化合物，在上相的富PEG-400相中目標(biāo)萃取物富

9、集效果良好，富集倍數(shù)均能達(dá)到5倍以上。與乙醇作為溶劑相比，PEG-400水溶液作為萃取溶劑具有較好的萃取選擇性；通過不同萃取方法的比較，超聲場可輔助強(qiáng)化萃取過程，提高萃取效率。
　　5、采用微波輔助萃取技術(shù)，以PEG-400-(NH4)2SO4雙水相體系作為萃取溶劑，利用單因素試驗(yàn)結(jié)合響應(yīng)面的Box-Behnke n設(shè)計(jì)分析優(yōu)化了鬼箭羽中酚酸化合物的萃取條件。微波輔助-雙水相萃取的最佳萃取條件為：最佳萃取條件為雙水相組成為18%（