可見光分光光度計(jì)的操作方法

1、可見光分光光度計(jì)的操作方法 可見光分光光度計(jì)的操作方法學(xué)時(shí)： 學(xué)時(shí)：2 學(xué)時(shí) 學(xué)時(shí)一、實(shí)驗(yàn)原理 一、實(shí)驗(yàn)原理利用可見光等測(cè)定物質(zhì)的吸收光譜，利用此光譜對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析和物質(zhì)結(jié)構(gòu)分析的方法，稱為分光光度法，使用的儀器是分光光度計(jì)。分光光度計(jì)靈敏度高，測(cè)定速度快，應(yīng)用范圍廣，是生物化學(xué)研究中必不可少的基本手段之一?？梢姽夤庾V：光是電磁波，可用波長(zhǎng)“λ”表示，電磁波譜是由不同性質(zhì)的連續(xù)波長(zhǎng)的光譜所組成，對(duì)于生物化學(xué)來(lái)說(shuō)，最重要的波長(zhǎng)區(qū)域

2、是可見光和紫外光。光的波長(zhǎng)是二個(gè)相鄰的波峰之間的距離。λ=C/V 其中，λ-波長(zhǎng)；C-光速；V-頻率；單位時(shí)間要通過(guò)一個(gè)定點(diǎn)的波數(shù)?？梢娢展庾V是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了可見輻射光后，發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團(tuán)的信息。可以用標(biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。根據(jù)朗伯-比爾（Lambert- Beer）定律：A=εbc，（A 為吸光度，ε 為摩爾吸光系數(shù)，b 為液池厚度，c 為溶液濃度

3、）可以對(duì)溶液進(jìn)行定量分析。ε 越大，吸收光的能力越強(qiáng)，相應(yīng)的分光光度法測(cè)定的靈敏度就越高。ε 值越大，說(shuō)明電子躍遷的幾率越大，通常 ε=10～105：一般認(rèn)為 ε>104 為強(qiáng)吸收；ε=103～104 為較強(qiáng)吸收；ε<102 為弱吸收，此時(shí)分光光度法不靈敏。通常使用分光光度計(jì)可檢測(cè)出的最小吸收度 A=0.001，所以 b=1cm，ε=105 時(shí)，可檢測(cè)的溶液最小濃度是C=10-8mol/L。二、分光光度計(jì)的基本參數(shù)和組成與構(gòu)

4、造 二、分光光度計(jì)的基本參數(shù)和組成與構(gòu)造1. 722S 可見光分光光度計(jì)的基本參數(shù)波長(zhǎng)范圍：340-1000nm波長(zhǎng)精度：±2nm（360-600nm）表面刻度：（T）0-100%（A）0-22. 組成與結(jié)構(gòu)各種型號(hào)的分光光度計(jì)不論是何種型式，基本上都是由五部分組成：用標(biāo)準(zhǔn)曲線法對(duì)物質(zhì)定量 用標(biāo)準(zhǔn)曲線法對(duì)物質(zhì)定量取已知含量的標(biāo)準(zhǔn)樣品按樣品各自的分析規(guī)定制備樣品溶液及背景溶液設(shè)波長(zhǎng)，置空白，條；調(diào)零，置“吸光度” ，讀出樣品吸光

5、度重復(fù)上述讀出各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度繪制已知含量及讀得吸光度繪制坐標(biāo)圖并畫出最佳曲線讀未知樣品的吸光度，在曲線表上找出對(duì)應(yīng)的濃度直接使用濃度直讀功能 直接使用濃度直讀功能直接使用濃度因子功能 直接使用濃度因子功能五、注意事項(xiàng)： 五、注意事項(xiàng)：1、儀器在運(yùn)行中禁止將樣品池蓋長(zhǎng)時(shí)間蓋上，以防光電管疲勞；2、使用時(shí)必須把比色皿外面的液體用濾紙吸干，方可放入樣品池架內(nèi)；3 、儀器使用完后，必須關(guān)閉電源，并將比色皿用高純水沖洗干凈，將外部的水用濾紙吸