食管癌18q11.218q12.2微衛(wèi)星dna標(biāo)記雜合性丟失的研究

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文食管癌18q11.2-18q12.2微衛(wèi)星DNA標(biāo)記雜合性丟失的研究姓名：馬萍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：任常山2001.4.1通過查詢 基因 數(shù) 據(jù)庫 ( h t t p : 刀 w w w . g d b . o r g ) 獲 得， 引 物 序列由上海 S a n g o n生物工程公 司合成。l O u l P C R反應(yīng)體系中 加入模版 D N A , d N T P , 1 0

2、* b u f f e r , T a g D N A 聚 合酶 及上， 下 游引 物， 礦物油覆蓋，混勻，置G e n e A m p l i P C R 9 6 0 0 儀上反應(yīng)， P C R 擴(kuò)增反應(yīng)條件為起始 9 4 0 C 變性 4 m i n , 9 4 0 C 變性 3 0 s e c , 5 5 ℃ 退火 3 0 s e c , 7 2 0 C延伸 6 0 s e c反應(yīng)3 0 個(gè)循環(huán)， 最后 7 2 ℃延伸

3、 5 m i n , 4 0 C 保存。 取1 0 u 1 P C R 擴(kuò)增產(chǎn)物與 5 u 1 加樣緩沖液 ( 9 7 % 甲酞胺，0 . 2 m m o l / LE D T A , 0 . 0 5 % 澳酚藍(lán)， 0 . 0 5 % 二甲 苯青藍(lán)F F ) 混 合， 混合物9 5 ℃ 變性 5 m i n后立即置于冰上。上樣于 8 % 變性聚丙烯酞胺凝膠 ( 含8 m o l / L 尿素)電 泳 ( 8 0 v , 3

4、 小時(shí)) ， 硝酸銀染色， 觀察結(jié)果。L O H 判定: 將癌組織與同 一病例的 癌旁組織基因組 D N A 的 P C R結(jié)果同時(shí)比 較， 若癌組織的某一部 位等位基因 條帶消失或密度減少5 0 % 以 上， 則為L O H : 若等位基因?yàn)?純合子， 則為 無信息個(gè)體。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用 P C R ( P o l y m e r a s e C h a i n R e a c t i o n ， 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) 擴(kuò)增， 結(jié)合S S

5、 L P 一 硝酸銀染色方法對選取的2 6 例配對的 食管癌及其癌旁組織的 1 8 號染色體 1 8 g l l . 2 - 1 2 . 2 之間3 個(gè)微衛(wèi)星D N A 多態(tài)性標(biāo)記 位點(diǎn) D 1 8 S 8 7 7 , D 1 8 S 5 3 5 , D 1 8 S 9 7 8 的 雜合 性丟失 進(jìn)行了 檢測， 這些位點(diǎn)的L O H 頻率見表 2 ， 每個(gè)樣品在每個(gè)位點(diǎn)的L O H 情況見表3 。 首先檢測了2 6 份標(biāo)本在D

6、 1 8 S 9 7 8 位點(diǎn)的L O H ， 發(fā)現(xiàn)在2 3份雜合子中 有 1 4 份呈L O H , 頻率為6 0 . 8 % ， 接著又檢測了2 2 份樣品 在與D 1 8 S 9 7 8 相鄰的D 1 8 S 5 3 5 位點(diǎn)的L O H ， 發(fā)現(xiàn)在 1 8 份雜 合子中 7例為 L O H ，丟失頻率為 3 8 . 8 % ， 進(jìn)一步檢測了 位于 D 1 8 S 5 3 5近著絲粒端 1 0 c m的D 1 8 S 8 7 7