胸腺瘤微衛(wèi)星不穩(wěn)定和雜合性缺失的研究.pdf

1、微衛(wèi)星是廣泛存在于原核及真核細胞基因組中的簡單串聯(lián)重復(fù)DNA序列,并具有高度多態(tài)性,變異率極低,以孟德爾共顯性方式遺傳.人類許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與基因組特定微衛(wèi)星DNA遺傳的不穩(wěn)定性(Microsatellite instability,MSl)及相應(yīng)等位基因的雜合性缺失(Loss of heterozygosity,LOH)有關(guān),某些特異染色體微衛(wèi)星的LOH多同時伴有該位點上的抑癌基因失活,并在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用.許多散

2、發(fā)性腫瘤如白血病、膀胱癌、黑色素瘤、膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、神經(jīng)母細胞瘤中均發(fā)現(xiàn)有廣泛MSI現(xiàn)象.現(xiàn)已證實高等真核細胞中存在錯配修復(fù)基因系統(tǒng)(Mismatch repair gene system,MMR),參與復(fù)制后的修復(fù),通過消除DNA合成的錯誤以保持DNA復(fù)制的穩(wěn)定性和保真性;目前己知的MMR系統(tǒng)中主要包括6種基因,即hMLH1,hMSH2,hMSH3,hPMS1,hPMS2和hMSH6.當(dāng)MMR基因功能失活(如基因突變、啟動子區(qū)甲基化)

3、,就不能修復(fù)DNA復(fù)制過程中的錯誤,易導(dǎo)致微衛(wèi)星DNA重復(fù)序列的不穩(wěn)定,表現(xiàn)為MSI和LOH.因此,對胸腺瘤中微衛(wèi)星不穩(wěn)定性研究有助于認(rèn)識胸腺瘤發(fā)生、發(fā)展機制,更好揭示胸腺瘤發(fā)病分子基礎(chǔ).我們選用5個微衛(wèi)星多態(tài)性標(biāo)記檢測胸腺瘤中MSI和LOH發(fā)生情況,并初步探討MSI和LOH與胸腺瘤臨床病理特點的關(guān)系。 一、目的：通過檢測胸腺瘤微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)和雜合性缺失(LOH)發(fā)生頻率,探討上述遺傳學(xué)改變與胸腺瘤臨床病理特點的關(guān)系.

4、 二、方法：30例石蠟包埋組織均來自2000～2005年間南京軍區(qū)總醫(yī)院存檔病理標(biāo)本.所有病例經(jīng)病理證實為胸腺瘤.選擇5個微衛(wèi)星位點:D6S1708、D11S988、D8S136、DM、TP53,從石蠟包埋的存檔標(biāo)本中選取腫瘤組織和與其對應(yīng)的自身正常對照組織,提取DNA后用PCR擴增,6﹪聚丙稀酰胺凝膠電泳,銀染顯色后進行MSI和LOH分析.用免疫組化S-P法觀察EGFR、P53、Bcl-2及Ki-67標(biāo)記指數(shù)(Ki-67LI)在

5、胸腺瘤中表達情況.采用SPSS10.0統(tǒng)計學(xué)軟件包分析和處理實驗結(jié)果數(shù)據(jù). 三、結(jié)果：本研究中,43.3﹪(13/30)的胸腺瘤在5個微衛(wèi)星位點上發(fā)生至少一個遺傳畸變,LOH與MSI發(fā)生率分別為30﹪(9/30)與23.3﹪(7/30).在30例胸腺瘤中有20﹪(6/30)發(fā)生D6S1708位點LOH,3.3﹪(1/30)發(fā)生D6S1708位點MSI;10﹪(3/30)發(fā)生D11S988位點LOH;16.7﹪(5/30)發(fā)生DM

6、位點的MSI;3.3﹪(1/30)發(fā)生TP53位點的LOH;6.7﹪(2/30)發(fā)生TP53位點的MSI,在D8S136位點上未發(fā)現(xiàn)有MSI或者LOH.經(jīng)統(tǒng)計胸腺瘤MSI和LOH發(fā)生與患者年齡、性別、是否合并重癥肌無力(MG)、臨床分期以及免疫組化EGFR、Bcl-2、Ki-67 Li表達均未見明顯相關(guān)性(p>0.05).B3和C型胸腺瘤與A、AB、B1及B2型相比表現(xiàn)出更多的遺傳畸變,LOH及MSI總發(fā)生率可見明顯統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.