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1、微生物檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化與自動(dòng)化對(duì)臨床診斷的意義復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院 趙 虎2010-5-12,臨床微生物檢驗(yàn)的工作與流程微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化的含義及其意義微生物檢驗(yàn)自動(dòng)化的含義及其意義,主要內(nèi)容,一、臨床微生物檢驗(yàn) 的工作與流程,涂片鏡檢,接種培養(yǎng),標(biāo)本采集,鑒 定,藥 敏,病原報(bào)告,,,,,,,工作之一—病原學(xué)診斷,工作之一—臨床咨詢,,病原學(xué)診斷,耐藥監(jiān)測(cè),流行病學(xué)調(diào)查,臨床咨詢、會(huì)診,,,,實(shí)驗(yàn)室
2、 臨床 患者,,,高質(zhì)量的微生物實(shí)驗(yàn)室報(bào)告,對(duì)正確的臨床決策很重要,臨床的顧慮,臨床投訴率最高速度慢檢出率低準(zhǔn)確率低,如何提高微生物檢驗(yàn)質(zhì)量——標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化,合格的標(biāo)本采集和送檢標(biāo)準(zhǔn)化的工作流程自動(dòng)化的檢測(cè)系統(tǒng)縮短報(bào)告時(shí)間 —血培養(yǎng)三級(jí)報(bào)告臨床報(bào)告與咨詢,信心源于質(zhì)量,二、微生物檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化,標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)量體系的認(rèn)證ISO15189CAP國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和指南的應(yīng)用WHO標(biāo)準(zhǔn)CLSI藥敏分析指南,標(biāo)準(zhǔn)化的含義,國(guó)
3、際標(biāo)準(zhǔn)與指南,規(guī)范檢驗(yàn)流程提高檢驗(yàn)質(zhì)量實(shí)現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)提高員工素質(zhì)增加在醫(yī)療市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力作為醫(yī)療糾紛舉證的證據(jù)提高學(xué)術(shù)地位,標(biāo)準(zhǔn)化的意義,標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀—不容樂觀,自動(dòng)化程度低手工操作多主觀判斷多技術(shù)人員的經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)要求高缺乏統(tǒng)一的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)儀器廠商缺乏有效的溝通和比對(duì),實(shí)現(xiàn)統(tǒng)一的國(guó)際、國(guó)家或地區(qū)標(biāo)準(zhǔn) ——標(biāo)準(zhǔn)化的SOP及執(zhí)行及時(shí)更進(jìn)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)或指南的更新 ——及時(shí)引進(jìn)、翻譯和培訓(xùn)標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)量認(rèn)證體系的認(rèn)證 —
4、—ISO15189或CAP及時(shí)主動(dòng)與臨床溝通 ——咨詢、建議和改進(jìn)儀器的自動(dòng)化改進(jìn) ——樣本處理、接種、培養(yǎng)、鑒定和藥敏,標(biāo)準(zhǔn)化的進(jìn)程,標(biāo)準(zhǔn)化的具體內(nèi)容,樣本采集的標(biāo)準(zhǔn)化—采集的類型、時(shí)機(jī)、方法樣本運(yùn)送的標(biāo)準(zhǔn)化—容器、時(shí)間、溫度樣本處理的標(biāo)準(zhǔn)化—鏡檢、液化樣本接種的標(biāo)準(zhǔn)化—手工(四區(qū))、自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)化—培養(yǎng)基、溫度、CO2、時(shí)間細(xì)菌鑒定的標(biāo)準(zhǔn)化—手工、板條、儀器體外藥敏試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化—KB法、MIC法,樣本采
5、集的標(biāo)準(zhǔn)化,樣本采集的標(biāo)準(zhǔn)化類型:根據(jù)感染的類型,合理選擇正確的臨床樣本,有局部癥狀或體征者,取感染局部標(biāo)本,如痰、咽拭、中段尿、胸腹水等,如確切局部癥狀體征者,取血。時(shí)機(jī):正確選擇恰當(dāng)?shù)臉颖静杉瘯r(shí)機(jī),如痰標(biāo)本—晨痰;血培養(yǎng)—早期、發(fā)熱前、抗菌藥物治療前。方法:注射器抽取、棉拭沾取。部位:如盆腔炎,經(jīng)陰道后穹窿抽取。,樣本運(yùn)送的標(biāo)準(zhǔn)化,樣本運(yùn)送的標(biāo)準(zhǔn)化容器:塑料、無菌、螺旋蓋時(shí)間:盡快(一般2h內(nèi),腦脊液15min內(nèi),厭氧菌
6、床邊接種)溫度:中段尿標(biāo)本低溫(4℃) 其他標(biāo)本常溫,樣本處理的標(biāo)準(zhǔn)化,樣本處理的標(biāo)準(zhǔn)化鏡檢:痰標(biāo)本接種前革蘭染色、鏡檢,低倍鏡下白細(xì)胞≥25,上皮細(xì)胞≤10洗凈:滅菌生理鹽水清洗痰液液化:痰標(biāo)本液化(胰酶),樣本接種的標(biāo)準(zhǔn)化,樣本接種的標(biāo)準(zhǔn)化手工(四區(qū)):接種環(huán)、燒灼自動(dòng):不同廠商,細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)化,細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)基:血瓊脂平板、麥康凱、中國(guó)藍(lán)、巧克力瓊脂、其他選擇培養(yǎng)基溫度:35-37℃CO2
7、: 初代培養(yǎng),尤其呼吸道標(biāo)本時(shí)間:24-48h,血培養(yǎng)5d,細(xì)菌鑒定的標(biāo)準(zhǔn)化,細(xì)菌鑒定的標(biāo)準(zhǔn)化自配試劑手工板條半自動(dòng)儀器全自動(dòng)分析系統(tǒng),體外藥敏試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化,體外藥敏試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化KB法:培養(yǎng)基種類(M-H瓊脂)、質(zhì)量(厚度4mm,pH)、藥敏紙片質(zhì)量MIC法:5個(gè)稀釋濃度—肉湯稀釋法、微量肉湯稀釋法、全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng),上海在微生物標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程中的工作,三、微生物檢驗(yàn)的自動(dòng)化,高度自動(dòng)化操作,減少人為誤差統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),自
8、動(dòng)化含義,微生物實(shí)驗(yàn)室的自動(dòng)化與生化、免疫檢測(cè)的自動(dòng)化程度相去尚遠(yuǎn)。手工操作多:樣本處理、涂片染色、接種培養(yǎng)。主觀判斷多:儀器的自動(dòng)化程度低、鑒定的參數(shù)少,需結(jié)合細(xì)菌形態(tài)和染色性、菌落形態(tài)特征、以及多個(gè)機(jī)外補(bǔ)充試驗(yàn)結(jié)果。,自動(dòng)化現(xiàn)狀-不盡人意,,自動(dòng)化的障礙,方法的局限,關(guān)鍵環(huán)節(jié)離不開人工樣本處理、涂片染色、分純、挑選致病菌、配置菌液、血清學(xué)實(shí)驗(yàn)、藥敏紙片法……對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室的投入較少人員、設(shè)備、資金……,自動(dòng)化的進(jìn)展-血培養(yǎng)
9、,手工,第一代,第二代,第三代,,,,,血培養(yǎng)檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)展,,檢測(cè)靈敏度增加,鑒定藥敏系統(tǒng)自動(dòng)化,手 工,半自動(dòng),全自動(dòng),全自動(dòng),,鑒定藥敏系統(tǒng)自動(dòng)化,自動(dòng)化系統(tǒng)發(fā)展趨勢(shì),提高速度---快簡(jiǎn)化流程---快,方便專家系統(tǒng)---準(zhǔn),臺(tái)灣長(zhǎng)庚醫(yī)院,今后的發(fā)展趨勢(shì)——速度快、檢出率高到目前為止,微生物檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)依然以細(xì)菌生長(zhǎng)過程中顯示的特性為依據(jù),快速的分子生物學(xué)方法只在鑒定和初篩步驟及科研應(yīng)用分子生物學(xué)方法的發(fā)展瓶頸技術(shù)難度—細(xì)
10、菌型別多無法確認(rèn)細(xì)菌的活動(dòng)能力無法確定耐藥情況RNA逆轉(zhuǎn)錄受條件限制,分子生物學(xué)方法-非培養(yǎng)法,現(xiàn)代化和標(biāo)準(zhǔn)化的重要性,若微生物實(shí)驗(yàn)室發(fā)展過度滯后將對(duì)感染的正確診斷和治療構(gòu)成嚴(yán)重威脅不利于感染的病原學(xué)診斷;不利于抗菌藥物的用藥控制,導(dǎo)致耐藥菌和藥 物費(fèi)用增長(zhǎng)過快;不利于醫(yī)院感染暴發(fā)的早期發(fā)現(xiàn)和控制;不利于感染發(fā)病機(jī)制的研究和防治;不利于臨床醫(yī)師對(duì)不斷變遷的感染病原菌和耐 藥性的正確認(rèn)識(shí),影響危重病的搶救成功
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