呼吸道病原體檢測ppt課件

1、呼吸道病原體檢測,陸歡平,呼吸道感染,呼吸道感染是指病原體感染人體的鼻腔、咽喉、氣管和支氣管等呼吸系統(tǒng)分為上呼吸道感染和下呼吸道感染,上呼吸道感染,常見急性上呼吸道感染，指鼻腔、咽或喉部急性炎癥的概稱，是呼吸道最常見的一種傳染病常見病因為病毒，少數(shù)由細菌引起?；颊卟环帜挲g、性別、職業(yè)和地區(qū)。不僅具有較強的傳染性，而且可引起嚴重并發(fā)癥,下呼吸道感染,包括急性氣管/支氣管炎、慢性支氣管炎、肺炎、支氣管擴張等由病毒、細菌、支原體、衣原體

2、、軍團菌等微生物引起，其防治應遵循預防為主、準確診斷、及時治療的原則，治療時必須明確引起感染的病原體以選擇有效的抗生素,呼吸道病原體,常見的呼吸道病原體主要有病毒、細菌、支原體、衣原體和立克次體等據(jù)統(tǒng)計，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起一種病原體可引起多種臨床癥狀，同一臨床表現(xiàn)可由多種病原體引起,呼吸道病原體,細菌：細菌引起呼吸道感染的機會比病毒少。一旦感染，癥狀多較嚴重，定位比較明顯，如扁桃體炎、中耳炎、鼻竇炎等。由細菌引起的兒

3、童肺炎往往是流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌或金黃色葡萄球菌,呼吸道病原體,病毒，包括鼻病毒、冠病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒、腺病毒等,呼吸道病原體,支原體、衣原體感染導致的呼吸道感染與其它病原體感染的早期臨床表現(xiàn)類似。可能在2-3天后咳嗽的癥狀會表現(xiàn)比較突出。在小于30歲的年輕人中，肺炎支原體是最重要的下呼吸道病原體,非典型呼吸道病原體,是指除肺炎鏈球菌以外的病原體，包括嗜肺軍團菌(LP)、肺炎支原體(MP) 、肺炎衣原體(CP

4、) 、Q熱立克次體(貝納柯克斯體) 、腺病毒(ADV) 、呼吸道合胞病毒(RSV) 、流感病毒(IFV)和副流感病毒(PIV)等,非典型呼吸道病原體,這些病原體變異快，傳播廣，由于不易形成長期免疫力而難以預防和控制,流感病毒 副流感病毒病毒 呼吸道合胞病毒 腺病毒,呼吸道病原體檢測,現(xiàn)有的主要方法：病毒分離培養(yǎng)抗原檢測抗體檢測分子生物學方法等,檢測方法的比較,抗體、抗原檢測的比較,IgMIgG,機體產(chǎn)生

5、IgM一般需要一周左右的時間，而有免疫缺陷或免疫系統(tǒng)不健全的個體如兒童，特別是3歲以下的小孩，其產(chǎn)生抗體往往需要更久，且抗體產(chǎn)生的水平也較低若檢測的是IgG，則不能很好地區(qū)分既往感染和急性感染,因此，抗原檢測的方法對嬰幼兒和兒童的呼吸道感染的病因診斷、鑒別診斷和臨床用藥指導比抗體法更有優(yōu)勢檢測抗體IgM比IgG更有臨床意義,采樣,抗原檢測拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，不是向鼻腔伸入。 伸入距離為從耳垂部到鼻尖長度的一半

6、，一般針對兩周歲以下兒童，伸入距離約為拭子絨毛頭的長度兩倍拭子伸入后要輕輕捻動拭子轉3圈。 取樣后在一小時之內(nèi)洗脫到生理鹽水中，12小時內(nèi)送檢,抗原檢測采樣,采樣,抗體檢測,采樣對結果影響較大非典型感染多為干咳，無痰/少痰陽性率低（標本問題，病毒顆粒?。┛乖隗w內(nèi)存在時間短,抗原檢測的劣勢,九項呼吸道感染病原體IgM抗體檢測,檢測原理,間接免疫熒光法（IFA）是基于待測樣本中的抗體與吸附在載玻片上的抗原發(fā)生的反應。樣本

7、中存在的特異性抗體和抗原反應，未與抗原結合的免疫球蛋白在洗滌步驟中除去。在下一步驟中，抗原-抗體復合物與熒光素標記的抗人球蛋白反應，用免疫熒光顯微鏡觀察結果,試劑盒組成,實驗步驟1,樣本的稀釋：血清標本與PBS按1:1比例稀釋稀釋后的血清加入吸附劑中，徹底混勻。處理后的血清要離心10-15分鐘除去沉淀，以防干擾檢測,實驗步驟2,結果判斷,陰性結果熒光圖譜,軍團菌、肺炎衣原體和立克次體無熒光；支原體、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合

8、胞病毒和副流感病毒的細胞呈現(xiàn)紅色,陽性結果熒光圖譜,腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒對陽性血清的1-15%細胞的細胞核、胞漿或胞膜出現(xiàn)蘋果綠色熒光；軍團菌、衣原體或立克次體中所有的細菌呈現(xiàn)出蘋果綠色熒光；支原體對陽性血清在細胞外圍呈現(xiàn)蘋果綠色熒光,嗜肺軍團菌,陰性：熒光弱、少、不規(guī)則,嗜肺軍團菌,陽性：熒光密集，且亮度較好，桿狀形態(tài),肺炎支原體,陰性：紅色細胞周圍無或少量熒光，亮度弱,肺炎支原體,陽性：熒光占視野50%以上，

9、亮度好，形態(tài)為明顯的細胞膜或胞漿,Q熱立克次體,陰性：熒光弱、少、不規(guī)則,Q熱立克次體,陽性：熒光亮度強且數(shù)量多，形態(tài)典型,肺炎衣原體,陰性：熒光弱、少,肺炎衣原體,陽性：熒光密集，且亮度較好,腺病毒,陰性：熒光弱、少,腺病毒,陽性：熒光亮度強且數(shù)量多，平均每個視野的陽性細胞>3-5個,呼吸道合胞病毒,陰性：熒光弱、少,呼吸道合胞病毒,陽性：熒光亮度強且數(shù)量多，平均每個視野的陽性細胞>3-5個,甲型流感病毒,陰性：熒光弱、少

10、,甲型流感病毒,陽性：熒光亮度強且數(shù)量多，平均每個視野的陽性細胞>3-5個,乙型流感病毒,陰性：熒光弱、少,乙型流感病毒,陽性：熒光亮度強且數(shù)量多，平均每個視野的陽性細胞>3-5個,副流感病毒,陰性：熒光弱、少,副流感病毒,陽性：熒光亮度強且數(shù)量多，平均每個視野的陽性細胞>3-5個,方法的局限性,抗體水平無顯著上升時不能排除感染的可能性單一樣本抗體檢測結果不能幫助作出近期感染的診斷。應采集雙份樣本（急性期和康復期）同

11、時檢測來觀察血清轉化或抗體水平的明顯升高,方法的局限性,對患有自身免疫性疾病病人的血清，用IFA檢測時，支原體、腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒，會在細胞上發(fā)生非特異性反應，這些血清不能用此方法評價質控孔用于檢測這種現(xiàn)象,方法的局限性,在嗜肺軍團菌和Q熱立克次體中，有時血清會含有與卵抗原反應的抗體，所以使用卵黃囊固定抗原會出現(xiàn)非特異性熒光。當出現(xiàn)這種情況時，該血清就不能用IFA進行分析了,臨床實際效果圖,,,九聯(lián)檢,,,,