細胞電化學(xué)機制及MCF-7細胞電化學(xué)體外測定環(huán)境激素活性方法研究.pdf

1、本文以MCF-7細胞和PC-3細胞為模型細胞，采用電化學(xué)法、HPLC法、化學(xué)計量學(xué)法測定了細胞的伏安行為，分析了細胞電化學(xué)活性物質(zhì)的種類和含量，研究和揭示了細胞電化學(xué)伏安響應(yīng)機理；通過對比細胞分泌液和細胞質(zhì)的伏安行為，建立了基于細胞質(zhì)伏安行為的電化學(xué)檢測環(huán)境雌激素活性新方法，使環(huán)境雌激素的篩選更有效、簡單、快速和靈敏。
　　 研究結(jié)果概括如下：
　　 1、揭示了細胞電化學(xué)響應(yīng)機理。研究了活細胞懸浮液和細胞質(zhì)的電化學(xué)行為，

2、發(fā)現(xiàn)活細胞懸浮液的電化學(xué)信號來源于細胞分泌物中鳥嘌呤和黃嘌呤的氧化反應(yīng)，而不是通常人們推測的來源于活細胞本體或酶的電化學(xué)響應(yīng)。本文采用了超聲波和加熱滅活法破碎活細胞得到細胞質(zhì)，并檢測了其電化學(xué)信號，發(fā)現(xiàn)細胞質(zhì)的電化學(xué)信號遠高于活細胞懸浮液，并且加熱滅活法獲得的細胞質(zhì)的伏安信號更強，這是由于該方法獲得的細胞質(zhì)中鳥嘌呤和黃嘌呤的含量較高。
　　 2、建立了電化學(xué)法評價細胞活性系統(tǒng)。為了揭示細胞電化學(xué)信號與細胞活性的關(guān)系，本文采用了經(jīng)

3、典天然抗癌藥物紫杉醇和系列非強效天然抗癌藥物黃酮類化合物作為細胞活性抑制劑，使用電化學(xué)法研究了藥物對細胞活性的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著藥物作用時間和劑量的增加，細胞活性下降，細胞質(zhì)中鳥嘌呤和黃嘌呤的濃度下降，細胞質(zhì)電化學(xué)信號也隨之下降，并具有時間和劑量依賴性。采用MTT和流式細胞儀常規(guī)檢測法驗證電化學(xué)法的可靠性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩者的檢測結(jié)果與電化學(xué)法基本一致，說明基于細胞質(zhì)伏安行為建立的電化學(xué)評價細胞活性方法具有高靈敏性和可靠性。揭示了細胞質(zhì)電

4、化學(xué)行為與核苷酸代謝之間的關(guān)系。
　　 3、建立了細胞電化學(xué)檢測環(huán)境雌激素活性方法。比較了去激素MCF-7細胞與正常培養(yǎng)MCF-7細胞電化學(xué)行為及其細胞質(zhì)中電活性物質(zhì)成分的區(qū)別。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，去激素MCF-7細胞質(zhì)中的黃嘌呤和鳥嘌呤濃度降低，使細胞分泌黃嘌呤和鳥嘌呤能力降低，導(dǎo)致細胞和細胞質(zhì)的伏安信號減弱，說明去激素MCF-7細胞的活性下降；研究了標準雌激素雌二醇、環(huán)境雌激素壬基酚和雙酚A對去激素培養(yǎng)的MCF-7細胞增殖的影響，發(fā)現(xiàn)